| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 4-羟基异亮氨酸的概况 | 第7页 |
| 1.2 4-HIL的主要功能 | 第7-8页 |
| 1.2.1 促进胰岛细胞分泌胰岛素 | 第7页 |
| 1.2.2 降低并改善胰岛素抵抗 | 第7-8页 |
| 1.2.3 改善血脂异常 | 第8页 |
| 1.3 4-HIL的制备 | 第8-9页 |
| 1.3.1 种子提取法 | 第8页 |
| 1.3.2 化学-酶合成法 | 第8-9页 |
| 1.3.3 微生物发酵法 | 第9页 |
| 1.4 重组谷氨酸棒杆菌中4-HIL合成的相关途径 | 第9-13页 |
| 1.4.1 谷氨酸棒杆菌中Ile的合成途径 | 第9-10页 |
| 1.4.2 谷氨酸棒杆菌中NADPH的供应与Ile的合成 | 第10-11页 |
| 1.4.3 重组谷氨酸棒杆菌中4-HIL的合成途径 | 第11-12页 |
| 1.4.4 谷氨酸棒杆菌中ODHC活性的调节 | 第12-13页 |
| 1.4.5 谷氨酸棒杆菌中O_2的供应 | 第13页 |
| 1.5 立题背景与意义 | 第13-14页 |
| 1.6 主要研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 材料和方法 | 第15-26页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-19页 |
| 2.1.1 实验质粒和菌株 | 第15-16页 |
| 2.1.2 引物序列表 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.5 主要培养基和菌株的培养条件 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 分子实验操作 | 第19-21页 |
| 2.2.2 表达质粒和相关菌株的构建 | 第21-22页 |
| 2.2.3 敲除整合质粒和相关菌株的构建 | 第22-24页 |
| 2.2.4 重组菌株的摇瓶发酵 | 第24页 |
| 2.2.5 OD_(562)、残糖和pH的测定 | 第24页 |
| 2.2.6 氨基酸含量的测定 | 第24页 |
| 2.2.7 有机酸含量的测定 | 第24-25页 |
| 2.2.8 细胞膜渗透性的测定 | 第25页 |
| 2.2.9 胞内辅酶NADP~+和NADPH含量的测定 | 第25页 |
| 2.2.10 RT-qPCR检测基因转录水平的差异 | 第25页 |
| 2.2.11 重组谷氨酸棒杆菌中IDO活力的测定 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-43页 |
| 3.1 表达zwf对4-HIL发酵的影响 | 第26-29页 |
| 3.1.1 质粒pJYW-4-ido-zwf构建后的PCR验证 | 第26页 |
| 3.1.2 表达zwf对菌株生长状况的影响 | 第26-27页 |
| 3.1.3 表达zwf对菌株4-HIL及其它氨基酸产量的影响 | 第27-28页 |
| 3.1.4 表达zwf对菌株中ido转录水平和IDO活性的影响 | 第28-29页 |
| 3.2 表达zwf-ppnK及ΔpknG::ido置换对4-HIL发酵的影响 | 第29-33页 |
| 3.2.1 质粒pJYW-4-ido-zwf-ppnK构建后的PCR验证 | 第29页 |
| 3.2.2 表达zwf-ppnK及ΔpknG::ido置换对菌株生长状况的影响 | 第29-30页 |
| 3.2.3 表达zwf-ppnK及ΔpknG::ido置换对菌株4-HIL及其它氨基酸和有机酸产量影响 | 第30-31页 |
| 3.2.4 表达zwf-ppnK对SL02菌株胞内NADP~+和NADPH的影响 | 第31-32页 |
| 3.2.5 表达zwf-ppnK对SL02菌株中ido基因转录水平和IDO活性的影响 | 第32-33页 |
| 3.3 表达POS5及ΔpknG::ido置换对4-HIL发酵的影响 | 第33-37页 |
| 3.3.1 质粒pJYW-4-ido-POS5及菌株SL04构建后的PCR验证 | 第33页 |
| 3.3.2 表达POS5及ΔpknG::ido置换对菌株生长状况的影响 | 第33-35页 |
| 3.3.3 表达POS5及ΔpknG::ido置换对菌株4-HIL及其它氨基酸和有机酸产量的影响 | 第35-36页 |
| 3.3.4 表达POS5及ΔpknG::ido置换对菌株胞内NADP~+和NADPH的影响 | 第36页 |
| 3.3.5 表达POS5及ΔpknG::ido置换对菌株ido基因转录水平和IDO活性的影响 | 第36-37页 |
| 3.4 表达odhI和odhI-vgb对4-HIL发酵的影响 | 第37-40页 |
| 3.4.1 质粒pJYW-4-ido-odhI和pJYW-4-ido-odhI-vgb构建后的PCR验证 | 第37-38页 |
| 3.4.2 表达odhI和odhI-vgb对菌株生长状况的影响 | 第38页 |
| 3.4.3 表达odhI和odhI-vgb对4-HIL及其他氨基酸产量的影响 | 第38-39页 |
| 3.4.4 表达odhI和odhI-vgb对菌株ido基因转录水平和IDO活性的影响 | 第39-40页 |
| 3.5 ddh敲除对4-HIL发酵的影响 | 第40-43页 |
| 3.5.1 ddh敲除对菌株生长状况的影响 | 第40-41页 |
| 3.5.2 ddh敲除对4-HIL及其他氨基酸产量的影响 | 第41页 |
| 3.5.3 ddh敲除对菌株ido基因转录水平和IDO活性的影响 | 第41-42页 |
| 3.5.4 ddh敲除对菌株中Lys合成相关基因转录水平的影响 | 第42-43页 |
| 主要结论与展望 | 第43-45页 |
| 主要结论 | 第43-44页 |
| 展望 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第50页 |
| 作者申请学位论文或研究成果 | 第50页 |
