| 摘要 | 第4-9页 |
| Abstract | 第9-16页 |
| 目录 | 第17-20页 |
| 英文縮略词表 | 第20-22页 |
| 前言 | 第22-28页 |
| 实验材料 | 第28-31页 |
| 1、细胞株 | 第28页 |
| 2、药物和试剂 | 第28-30页 |
| 3、主要仪器设备 | 第30-31页 |
| 第一部分 靶向作用于LOX-1的MICRORNA的筛选 | 第31-53页 |
| 1. 引言 | 第31-32页 |
| 2. 实验方法 | 第32-44页 |
| 2.1 细胞培养和oxLDL损伤模型的制备 | 第32-33页 |
| 2.2 生物信息学预测靶向作用于LOX-1的microRNA | 第33页 |
| 2.3 oxLDL损伤后内皮细胞中预测microRNA表达变化检测 | 第33-35页 |
| 2.4 融合LOX-1 3’-UTR的野生型和突变型荧光素酶报告基因载体的构建 | 第35-39页 |
| 2.5 双荧光报告基因系统检测miRNA对融合LOX-1 3’-UTR荧光素酶报告基因的影响 | 第39-40页 |
| 2.6 正常内皮细胞let-7家族成员的检测 | 第40页 |
| 2.7 let-7a、let-7b、let-7c对HUVEC内源性LOX-1 mRNA及蛋白表达的影响 | 第40-44页 |
| 3. 结果 | 第44-50页 |
| 3.1 生物信息学预测靶向作用于LOX-1的microRNA | 第44页 |
| 3.2 OxLDL损伤后内皮细胞活力变化 | 第44-45页 |
| 3.3 oxLDL损伤内皮细胞中预测microRNA的表达变化 | 第45-46页 |
| 3.4 融合LOX-1 3’-UTR的荧光素酶报告基因构建 | 第46-47页 |
| 3.5 以双荧光报告基因实验验证靶向作用于LOX-1的microRNA | 第47-48页 |
| 3.6 Let-7家族对LOX-1 3’-UTR报告基因表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.7 正常HUVEC中let-7表达谱 | 第49页 |
| 3.8 MicroRNA对细胞内源性LOX-1基因和蛋白表达的影响 | 第49-50页 |
| 4. 讨论 | 第50-52页 |
| 5. 结论 | 第52-53页 |
| 第二部分 LET-7C/LOX-1/NF-κB信号调控环路研究 | 第53-74页 |
| 1. 研究背景 | 第53-54页 |
| 2. 实验方法 | 第54-66页 |
| 2.1 细胞培养与分组处理 | 第54-55页 |
| 2.2 Let-7a、let-7b、let-7c对p38MAPK磷酸化、NF-κB(p65)蛋白表达及和核易位的影响 | 第55-56页 |
| 2.3 siLOX-1及转染、抑制效率检测 | 第56-57页 |
| 2.4 siLOX-1、SB203580、PDTC对let-7a、let-7b、let-7c表达的影响 | 第57-58页 |
| 2.5 MiR-99a/let-7c启动子报告基因质粒的构建 | 第58-59页 |
| 2.6 NF-κB表达质粒、MiR-99a/let-7c启动子报告基因质粒的转染及双荧光报告基因检测 | 第59-61页 |
| 2.7 凝胶迁移试验(Electrophoretic Mobility Shift Assay,EMSA)验证NF-κB对miR-99a/let-7c启动子的调控作用 | 第61-65页 |
| 2.8 NF-κB表达质粒转染及pre-miR-99a、pre-let-7c、miR-99a、let-7c水平的检测 | 第65-66页 |
| 3. 结果 | 第66-71页 |
| 3.1 let-7a、let-7b> let-7c mimics 对人血管内皮细胞 LOX-l/p38MAPK/NF-KB 信号通路的影响 | 第66-67页 |
| 3.2 siLOX-1、SB203580、PDTC对内皮细胞let-7a、let-7b、let-7c表达的影响 | 第67-68页 |
| 3.3 NF-κB对let-7c启动子的调控作用 | 第68-69页 |
| 3.4 EMSA实验验证NF-κB对LET-7C启动子的调控作用 | 第69-70页 |
| 3.5 NF-κB对HUVEC内源性MIR-99A及LET-7C表达的调控作用 | 第70-71页 |
| 4. 讨论 | 第71-73页 |
| 5. 结论 | 第73-74页 |
| 第三部分 LET-7A、LET-7B、LET-7C对OXLDL所致人血管内皮损伤的抑制作用及其机制研究 | 第74-91页 |
| 1. 研究背景 | 第74-75页 |
| 2. 实验方法 | 第75-81页 |
| 2.1 oxLDL损伤后let-7a、let-7b、let-7c表达变化 | 第75-76页 |
| 2.2 细胞活力、NO、LDH含量测定 | 第76-78页 |
| 2.3 Hoechst 33342测定细胞凋亡形态学变化 | 第78-79页 |
| 2.4 FCM测定细胞凋亡率 | 第79页 |
| 2.5 ROS含量测定 | 第79-80页 |
| 2.6 实时定量PCR测定LOX-1和eNOS mRNA表达变化 | 第80页 |
| 2.7 Western-blot检测p38MAPK、p-p38MAPK、PKB、p-PKB、NF-κB、I B蛋白表达及NF-κB核易位 | 第80-81页 |
| 2.8 Western-blot检测LOX-1、eNOS蛋白表达 | 第81页 |
| 3. 结果 | 第81-87页 |
| 3.1 不同浓度oxLDL损伤HUVEC后,let-7a、let-7b、let-7c表达变化 | 第81-82页 |
| 3.2 oxLDL损伤HUVEC不同时间后,let-7a、let-7b、let-7c表达变化 | 第82页 |
| 3.3 let-7a、let-7b、let-7c对oxLDL损伤内皮细胞细胞活力、LDH、NO释放的影响 | 第82-83页 |
| 3.4 let-7a、let-7b、let-7c对oxLDL损伤内皮细胞凋亡的影响 | 第83-84页 |
| 3.5 let-7a、let-7b、let-7c对oxLDL损伤内皮细胞中ROS生成的影响 | 第84-85页 |
| 3.6 let-7a、let-7b、let-7c对oxLDL损伤内皮细胞中LOX-1、eNOS基因和蛋白表达的影响 | 第85页 |
| 3.7 let-7a、let-7b、let-7c对oxLDL损伤内皮细胞中p38MAPK、p-p38MAPK、PKB、p-PKB、表达的影响 | 第85-86页 |
| 3.8 let-7a、let-7b、let-7c对oxLDL损伤内皮细胞中I B蛋白表达及NF-κB核易位的影响 | 第86-87页 |
| 4. 讨论 | 第87-89页 |
| 5. 结论 | 第89-91页 |
| 参考文献 | 第91-99页 |
| 综述 | 第99-120页 |
| References | 第111-120页 |
| 攻读学位期间主要成果 | 第120-122页 |
| 一、已发表的主要论文 | 第120页 |
| 二、获奖情况 | 第120-121页 |
| 三、立项课题 | 第121-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
