| 目录 | 第3-6页 |
| 中文摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 中英文缩略表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-21页 |
| 第一节 癌症复发新力量：肿瘤干细胞及其微环境 | 第11-15页 |
| 1. 肿瘤干细胞的分离与鉴定 | 第12-13页 |
| 2. 肿瘤干细胞与肿瘤微环境 | 第13-14页 |
| 3. RNA结合蛋白Lin28与肿瘤干细胞 | 第14-15页 |
| 第二节 新的肿瘤研究思路：异常代谢的结果 | 第15-18页 |
| 1. 肿瘤细胞的代谢特点 | 第15-17页 |
| 2. 代谢型与干性维持的关系 | 第17-18页 |
| 第三节 肿瘤治疗的新视野 | 第18-19页 |
| 1. 传统的靶向癌基因策略 | 第18-19页 |
| 2. 肿瘤治疗的新靶向 | 第19页 |
| 第四节 本课题的假设和研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 材料与方法 | 第21-36页 |
| 第一节 实验材料 | 第21-24页 |
| 1. 仪器设备 | 第21-22页 |
| 2. 菌株、细胞系和载体 | 第22页 |
| 3. 实验试剂 | 第22-24页 |
| 第二节 溶液的配置 | 第24-27页 |
| 1. 细胞培养基和有关溶液 | 第24-25页 |
| 2. DEPC处理水(1L) | 第25页 |
| 3. 10×PBS(1L) | 第25页 |
| 4. 大肠杆菌培养基的配制 | 第25页 |
| 5. SDS-PAGE溶液配制 | 第25-26页 |
| 6. DNA电泳缓冲液配制(10×TBE) | 第26页 |
| 7. Western Blotting相关溶液 | 第26-27页 |
| 第三节 实验方法 | 第27-36页 |
| 1. 细胞培养 | 第27-28页 |
| 2. Western Blot | 第28-30页 |
| 3. RT-PCR和Real-time PCR | 第30-32页 |
| 4. 启动子双荧光报告质粒的构建 | 第32-34页 |
| 5. 细胞转染 | 第34页 |
| 6. 荧光素酶活性检测 | 第34-35页 |
| 7. 细胞划痕实验和体外成球实验 | 第35页 |
| 8. 流式细胞术 | 第35页 |
| 9. 数据统计 | 第35-36页 |
| 实验结果 | 第36-57页 |
| 第一节 肿瘤酸性微环境对人乳腺癌肿瘤干细胞的影响 | 第36-42页 |
| 1. 肿瘤酸性微环境增加人乳腺癌细胞系MDA-MB-231 ALDH~(high)细胞群比例 | 第36-37页 |
| 2. 肿瘤酸性微环境上调人乳腺癌细胞系MDA-MB-231干性基因的表达 | 第37-39页 |
| 3. 肿瘤酸性微环境提高人乳腺癌细胞系MDA-MB-231体外成球能力 | 第39-40页 |
| 4. 肿瘤酸性微环境增强人乳腺癌细胞系MDA-MB-231的迁移能力 | 第40-42页 |
| 第二节 肿瘤酸性微环境通过TCF4/β-catenin/Lin28b通路调节人乳腺癌肿瘤细胞干性 | 第42-47页 |
| 1. Lin28b可以调节干性基因的表达 | 第42-43页 |
| 2. 敲低Lin28b可以阻断酸性微环境诱导的干性基因的表达上调 | 第43-44页 |
| 3. 肿瘤酸性微环境激活TCF4/β-catenin信号通路 | 第44-45页 |
| 4. TCF4/β-catenin复合体可以在转录水平上调节Lin28b | 第45-47页 |
| 第三节 干性对于人乳腺癌肿瘤细胞有氧糖酵解的影响 | 第47-53页 |
| 1. 肿瘤干细胞亚群ALDH~(high)有氧糖酵解相关基因表达上调 | 第47页 |
| 2. 敲低Lin28b的表达可以下调人乳腺癌细胞有氧糖酵解相关基因的表达 | 第47-48页 |
| 3. 敲低Lin28b的表达可以增强人乳腺癌肿瘤细胞胞内ATP的生成 | 第48-49页 |
| 4. 敲低Lin28b的表达可以上调miR-34a-5p的表达 | 第49-50页 |
| 5. 过表达miR-34a-5p可以下调有氧糖酵解相关基因的表达 | 第50-51页 |
| 6. 抑制miR-34a-5p的表达可以上调有氧糖酵解相关基因的表达 | 第51-53页 |
| 第四节 肿瘤酸性微环境对人乳腺癌肿瘤细胞有氧糖酵解代谢的影响 | 第53-57页 |
| 1. 肿瘤酸性微环境可以通过下调miR-34a-5p上调有氧糖酵解相关基因的表达 | 第53页 |
| 2. 肿瘤酸性微环境可以上调缺氧诱导因子HIF1α的表达 | 第53-55页 |
| 3. 肿瘤酸性微环境下人乳腺癌肿瘤细胞胞内ATP的生成量降低 | 第55页 |
| 4. 抑制TCF4/β-catenin/Lin28b信号通路可以显著下调有氧糖酵解相关基因的表达 | 第55-57页 |
| 讨论 | 第57-61页 |
| 总结 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-68页 |
| 个人简历 | 第68-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
