| 摘要 | 第13-15页 |
| Abstract | 第15-16页 |
| 第一部分 前言 | 第17-20页 |
| 1. 肿瘤血管生成是肿瘤发生发展的重要过程 | 第17页 |
| 2. 血管内皮细胞是抗肿瘤血管生成的重要靶细胞 | 第17-18页 |
| 3. 基于中药活性成分的“多靶点”,隐丹参酮抑制肿瘤血管生成是其抗肿瘤的潜在作用方式 | 第18-19页 |
| 4. 课题假说的提出 | 第19页 |
| 5. 课题意义 | 第19-20页 |
| 第二部分 隐丹参酮抑制肿瘤血管生成的实验验证 | 第20-30页 |
| 摘要 | 第20页 |
| 1. 隐丹参酮抗VEGF诱导HUVEC的管腔形成的作用 | 第20-23页 |
| 1.1 实验材料 | 第20-21页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第20页 |
| 1.1.2 实验药物 | 第20页 |
| 1.1.3 实验试剂与耗材 | 第20-21页 |
| 1.1.4 实验仪器 | 第21页 |
| 1.2 实验方法 | 第21-22页 |
| 1.2.1 VEGF诱导HUVEC的小管形成 | 第21页 |
| 1.2.2 试剂配制方法 | 第21页 |
| 1.2.3 数据统计方法 | 第21-22页 |
| 1.3 实验结果 | 第22-23页 |
| 1.4 实验小结 | 第23页 |
| 2. 隐丹参酮抗VEGF诱导大鼠动脉环的血管芽生的作用 | 第23-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第23页 |
| 2.1.2 实验药物 | 第23页 |
| 2.1.3 实验试剂与耗材 | 第23页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.2.1 VEGF诱导大鼠动脉环的血管生成 | 第23-24页 |
| 2.2.2 试剂配制方法 | 第24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-25页 |
| 2.4 实验小结 | 第25页 |
| 3. 隐丹参酮抗B16F10荷瘤小鼠的瘤内血管生成的作用 | 第25-29页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第25页 |
| 3.1.2 实验细胞 | 第25-26页 |
| 3.1.3 实验药物 | 第26页 |
| 3.1.4 实验试剂与耗材 | 第26页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第26页 |
| 3.2 实验方法 | 第26-27页 |
| 3.2.1 B16F10荷瘤小鼠的瘤内血管生成 | 第26页 |
| 3.2.2 免疫组化 | 第26-27页 |
| 3.2.3 试剂配制方法 | 第27页 |
| 3.3 实验结果 | 第27-29页 |
| 3.4 实验小结 | 第29页 |
| 4. 实验总结 | 第29-30页 |
| 第三部分 隐丹参酮靶向血管生成的调控网络 | 第30-39页 |
| 摘要 | 第30页 |
| 1. 隐丹参酮调控的生物网络及其关键节点 | 第30-35页 |
| 1.1 实验软件与方法 | 第30页 |
| 1.1.1 实验软件与数据库 | 第30页 |
| 1.1.2 实验方法 | 第30页 |
| 1.2 实验过程与结果 | 第30-34页 |
| 1.3 实验小结 | 第34-35页 |
| 2. 隐丹参酮调控血管生成网络的节点预测 | 第35-38页 |
| 2.1 实验软件与方法 | 第35页 |
| 2.1.1 实验软件与数据库 | 第35页 |
| 2.1.2 实验方法 | 第35页 |
| 2.2 实验过程与结果 | 第35-38页 |
| 2.3 实验小结 | 第38页 |
| 3. 实验总结 | 第38-39页 |
| 第四部分 隐丹参酮诱导血管内皮细胞凋亡及其机制研究 | 第39-67页 |
| 摘要 | 第39页 |
| 1. 隐丹参酮诱导血管内皮细胞凋亡 | 第39-51页 |
| 1.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第39页 |
| 1.1.2 实验药物 | 第39页 |
| 1.1.3 实验试剂与耗材 | 第39-40页 |
| 1.1.4 实验仪器 | 第40页 |
| 1.2 实验方法 | 第40-46页 |
| 1.2.1 试剂配制方法 | 第40页 |
| 1.2.2 细胞活力的检测 | 第40-41页 |
| 1.2.3 细胞毒性的检测 | 第41页 |
| 1.2.4 细胞周期的检测 | 第41-42页 |
| 1.2.5 细胞形态的检测 | 第42页 |
| 1.2.6 细胞蛋白的提取方法 | 第42页 |
| 1.2.7 BCA蛋白定量 | 第42-43页 |
| 1.2.8 细胞蛋白的变性 | 第43页 |
| 1.2.9 Western Blot检测过程 | 第43-45页 |
| 1.2.10 细胞凋亡的检测(Annexin V-FITC/PI) | 第45页 |
| 1.2.11 细胞凋亡的检测(Hoechst33258) | 第45-46页 |
| 1.3 实验结果 | 第46-50页 |
| 1.3.1 隐丹参酮对血管内皮细胞增殖的影响 | 第46页 |
| 1.3.2 隐丹参酮对血管内皮细胞的细胞毒性 | 第46-47页 |
| 1.3.3 隐丹参酮对血管内皮细胞细胞周期的影响 | 第47页 |
| 1.3.4 隐丹参酮对血管内皮细胞自噬的影响 | 第47-48页 |
| 1.3.5 隐丹参酮对血管内皮细胞凋亡的影响 | 第48-50页 |
| 1.4 实验小结 | 第50-51页 |
| 2. 隐丹参酮对血管内皮细胞细胞色素C释放的影响 | 第51-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第51页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第51页 |
| 2.1.2 实验药物 | 第51页 |
| 2.1.3 实验试剂与耗材 | 第51页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第51页 |
| 2.2 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.2.1 线粒体的提取方法 | 第51-52页 |
| 2.2.2 胞内ROS含量检测方法 | 第52页 |
| 2.2.3 胞内Ca~(2+)含量检测方法 | 第52-53页 |
| 2.2.4 线粒体膜电位检测方法 | 第53页 |
| 2.3 实验结果 | 第53-56页 |
| 2.3.1 隐丹参酮对血管内皮细胞细胞色素C释放的影响 | 第53-54页 |
| 2.3.2 隐丹参酮对血管内皮细胞胞内Ca~(2+)浓度的影响 | 第54页 |
| 2.3.3 隐丹参酮对血管内皮细胞胞内ROS浓度的影响 | 第54-55页 |
| 2.3.4 隐丹参酮对血管内皮细胞线粒体膜电位的影响 | 第55-56页 |
| 2.4 实验小结 | 第56-57页 |
| 3. 隐丹参酮对血管内皮细胞内源性线粒体凋亡信号通路的影响 | 第57-61页 |
| 3.1 实验材料 | 第57页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第57页 |
| 3.1.2 实验药物 | 第57页 |
| 3.1.3 实验试剂与耗材 | 第57页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第57页 |
| 3.2 实验方法 | 第57-58页 |
| 3.3 实验结果 | 第58-61页 |
| 3.3.1 隐丹参酮对内源性线粒体凋亡信号通路的影响 | 第58-61页 |
| 3.3.2 隐丹参酮对外源性死亡受体凋亡信号通路的影响 | 第61页 |
| 3.4 实验小结 | 第61页 |
| 4. 隐丹参酮激活内源性线粒体凋亡信号通路的验证 | 第61-65页 |
| 4.1 实验材料 | 第61-62页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第61-62页 |
| 4.1.2 实验药物 | 第62页 |
| 4.1.3 实验试剂与耗材 | 第62页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第62页 |
| 4.2 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.2.1 聚乙烯醇海绵植入血管生成 | 第62-63页 |
| 4.2.2 血红蛋白标准曲线的绘制 | 第63页 |
| 4.2.3 血红蛋白含量的测定 | 第63页 |
| 4.2.4 组织蛋白的提取 | 第63页 |
| 4.3 实验结果 | 第63-65页 |
| 4.3.1 隐丹参酮对大鼠动脉环血管生成的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.2 隐丹参酮对聚乙烯醇海绵植入血管生成的影响 | 第64-65页 |
| 4.4 实验小结 | 第65页 |
| 5. 实验总结 | 第65-67页 |
| 第五部分 隐丹参酮诱导细胞色素C的释放及其机制研究 | 第67-82页 |
| 摘要 | 第67页 |
| 1. 隐丹参酮对血管内皮细胞的细胞色素C释放的时效影响 | 第67-68页 |
| 1.1 实验材料 | 第67-68页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第67页 |
| 1.1.2 实验药物 | 第67-68页 |
| 1.1.3 实验试剂与耗材 | 第68页 |
| 1.1.4 实验仪器 | 第68页 |
| 1.2 实验方法 | 第68页 |
| 1.3 实验结果 | 第68页 |
| 1.3.1 隐丹参酮作用时间与细胞色素C释放的关系 | 第68页 |
| 1.4 实验小结 | 第68页 |
| 2. 隐丹参酮对线粒体跨膜通透性转运孔的影响 | 第68-70页 |
| 2.1 实验材料 | 第68-69页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第68-69页 |
| 2.1.2 实验药物 | 第69页 |
| 2.1.3 实验试剂与耗材 | 第69页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第69页 |
| 2.2 实验方法 | 第69页 |
| 2.3 实验结果 | 第69-70页 |
| 2.3.1 隐丹参酮对线粒体跨膜通透性转运孔的影响 | 第69-70页 |
| 2.4 实验小结 | 第70页 |
| 3. 隐丹参酮对线粒体外膜机械性损伤的影响 | 第70-73页 |
| 3.1 实验材料 | 第70页 |
| 3.1.1 实验细胞 | 第70页 |
| 3.1.2 实验药物 | 第70页 |
| 3.1.3 实验试剂与耗材 | 第70页 |
| 3.1.4 实验仪器 | 第70页 |
| 3.2 实验方法 | 第70-71页 |
| 3.2.1 透射电镜观察线粒体结构 | 第70-71页 |
| 3.3 实验结果 | 第71-72页 |
| 3.3.1 隐丹参酮引起血管内皮细胞胞内Ca~(2+)超载的时效关系 | 第71页 |
| 3.3.2 隐丹参酮引起血管内皮细胞胞内ROS超载的时效关系 | 第71-72页 |
| 3.3.3 隐丹参酮引起血管内皮细胞线粒体膜结构破坏的时效关系 | 第72页 |
| 3.4 实验小结 | 第72-73页 |
| 4. 隐丹参酮对线粒体外膜上特异性通道形成的影响 | 第73-80页 |
| 4.1 实验材料 | 第73页 |
| 4.1.1 实验细胞 | 第73页 |
| 4.1.2 实验药物 | 第73页 |
| 4.1.3 实验试剂与耗材 | 第73页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第73页 |
| 4.2 实验方法 | 第73-75页 |
| 4.2.1 Bim siRNA转染方案 | 第73-74页 |
| 4.2.2 蛋白质免疫共沉淀 | 第74页 |
| 4.2.3 线粒体探针的装载 | 第74-75页 |
| 4.2.4 细胞荧光免疫组化 | 第75页 |
| 4.3 实验结果 | 第75-80页 |
| 4.3.1 隐丹参酮诱导的Bcl-2蛋白家族蛋白表达变化情况 | 第75-76页 |
| 4.3.2 隐丹参酮诱导细胞色素C的释放与Bim_(EL)的关系 | 第76-79页 |
| 4.3.3 隐丹参酮诱导细胞色素C的释放与Bim与Bax的复合物的关系 | 第79-80页 |
| 4.4 实验小结 | 第80页 |
| 5. 实验总结 | 第80-82页 |
| 第六部分 隐丹参酮对静息态内皮细胞的不敏感性 | 第82-90页 |
| 摘要 | 第82页 |
| 1. 静息态内皮细胞模型的构建与验证 | 第82-86页 |
| 1.1 实验材料 | 第82页 |
| 1.1.1 实验细胞 | 第82页 |
| 1.1.2 实验试剂与耗材 | 第82页 |
| 1.2 实验方法 | 第82-84页 |
| 1.2.1 静息态内皮细胞模型的构建与验证 | 第82-83页 |
| 1.2.2 Ki67-细胞增殖检测 | 第83页 |
| 1.2.3 VE-Cadherin蛋白的表达与定位 | 第83-84页 |
| 1.3 实验结果 | 第84-86页 |
| 1.3.1 血管内皮细胞的增殖变化 | 第84页 |
| 1.3.2 血管内皮细胞的形态变化 | 第84-85页 |
| 1.3.3 血管内皮细胞的增殖蛋白Ki-67/PI表达影响 | 第85-86页 |
| 1.3.4 血管内皮细胞的VE-cadherin定位影响 | 第86页 |
| 1.4 实验小结 | 第86页 |
| 2. 隐丹参酮对静息态血管内皮细胞的影响 | 第86-89页 |
| 2.1 实验材料 | 第86-87页 |
| 2.1.1 实验细胞 | 第86页 |
| 2.1.2 实验药物 | 第86页 |
| 2.1.3 实验试剂与耗材 | 第86页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第86-87页 |
| 2.2 实验方法 | 第87页 |
| 2.3 实验结果 | 第87-89页 |
| 2.3.1 隐丹参酮对静息态血管内皮细胞形态的影响 | 第87页 |
| 2.3.2 隐丹参酮对静息态血管内皮细胞增殖的影响 | 第87页 |
| 2.3.3 隐丹参酮对静息态血管内皮细胞凋亡的影响 | 第87-88页 |
| 2.3.4 隐丹参酮对静息态血管内皮细胞内源性线粒体细胞凋亡通路的影响 | 第88页 |
| 2.3.5 隐丹参酮对静息态血管内皮细胞细胞色素C释放的影响 | 第88-89页 |
| 2.4 实验小结 | 第89页 |
| 3. 实验总结 | 第89-90页 |
| 总结与展望 | 第90-92页 |
| 1. 总结 | 第90-91页 |
| 2. 论文的创新点 | 第91页 |
| 3. 研究的不足和展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-98页 |
| 第一部分 参考文献 | 第92-93页 |
| 第二部分 参考文献 | 第93页 |
| 第三部分 参考文献 | 第93-95页 |
| 第四部分 参考文献 | 第95-96页 |
| 第五部分 参考文献 | 第96-97页 |
| 第六部分 参考文献 | 第97-98页 |
| 综述 | 第98-105页 |
| 参考文献 | 第102-105页 |
| 附录 | 第105-108页 |
| 常用试剂的配置方法 | 第105-107页 |
| 抗体情况一览表 | 第107-108页 |
| 英文缩略词 | 第108-109页 |
| 攻读硕士学位期间取得的学术成果 | 第109-111页 |
| 发表文章 | 第109-110页 |
| 获得奖项 | 第110-111页 |
| 致谢 | 第111页 |
