| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 引言 | 第9-22页 |
| 1.1 乙型肝炎病毒(HBV)及慢性乙型肝炎 | 第9-15页 |
| 1.1.1 HBV的形态及结构 | 第9-10页 |
| 1.1.2 HBV基因组 | 第10-12页 |
| 1.1.3 HBV的生活周期 | 第12-13页 |
| 1.1.4 慢性乙型肝炎流行病学 | 第13页 |
| 1.1.5 药物研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2 乙型肝炎病毒相关性肝癌 | 第15-16页 |
| 1.3 乙型肝炎相关性肝癌诊断的生物标志物研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 BOP1和PEBP4的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.5 本研究的研究背景及意义 | 第18-22页 |
| 第2章 实验材料和方法 | 第22-46页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-30页 |
| 2.1.1 实验细胞及质粒 | 第22-24页 |
| 2.1.2 实验试剂及耗材 | 第24-26页 |
| 2.1.3 实验仪器设备 | 第26-27页 |
| 2.1.4 培养基及实验各溶液配方 | 第27-30页 |
| 2.2 实验方法 | 第30-46页 |
| 2.2.1 重组过表达质粒的构建 | 第30-35页 |
| 2.2.2 干扰RNA的构建 | 第35-37页 |
| 2.2.3 重组质粒的鉴定 | 第37-39页 |
| 2.2.4 细胞培养 | 第39-40页 |
| 2.2.5 细胞瞬时转染(LipofectamineTM2000) | 第40页 |
| 2.2.6 荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第40-41页 |
| 2.2.7 WesternBlot | 第41-43页 |
| 2.2.8 细胞增殖实验 | 第43-44页 |
| 2.2.9 细胞迁移实验 | 第44页 |
| 2.2.10 细胞凋亡实验 | 第44-45页 |
| 2.2.11 免疫荧光检测BOP1和PEBP4表达定位 | 第45页 |
| 2.2.12 统计学结果分析 | 第45-46页 |
| 第3章 真核重组质粒的构建及表达 | 第46-66页 |
| 3.1 目的基因真核重组过表达质粒的构建 | 第46-51页 |
| 3.1.1 过表达质粒pcDNA3.1-BOP1的构建 | 第46-49页 |
| 3.1.2 过表达质粒pcDNA3.1-PEBP4的构建 | 第49-51页 |
| 3.2 目的基因真核干扰质粒的构建 | 第51-56页 |
| 3.2.1 基因BOP1真核干扰质粒的构建 | 第52-53页 |
| 3.2.2 基因PEBP4真核干扰质粒的构建 | 第53-55页 |
| 3.2.3 真核无关干扰质粒的构建 | 第55-56页 |
| 3.3 目的基因转染HEPG2细胞 | 第56-57页 |
| 3.3.1 真核过表达质粒转染HepG2细胞 | 第57页 |
| 3.3.2 真核干扰质粒转染HepG2细胞 | 第57页 |
| 3.4 荧光定量PCR检测目的基因的MRNA表达水平 | 第57-61页 |
| 3.4.1 基因BOP1的mRNA表达水平 | 第57-59页 |
| 3.4.2 基因PEBP4的mRNA的表达水平 | 第59-61页 |
| 3.5 WESTERNBLOT检测目的基因蛋白的表达水平 | 第61-62页 |
| 3.5.1 BOP1蛋白的表达水平 | 第61-62页 |
| 3.5.2 PEBP4蛋白的表达水平 | 第62页 |
| 3.6 BOP1和PEBP4在细胞内的表达定位 | 第62-63页 |
| 3.7 BOP1和PEBP4的内源性表达 | 第63-64页 |
| 3.7.1 BOP1的内源性表达 | 第63-64页 |
| 3.7.2 BOP1的内源性表达 | 第64页 |
| 3.8 小结 | 第64-66页 |
| 第4章 基因功能的初步研究 | 第66-81页 |
| 4.1 基因表达变化对HEPG2细胞增殖的影响 | 第66-69页 |
| 4.1.1 基因BOP1表达水平变化对HepG2细胞增殖的影响 | 第66-67页 |
| 4.1.2 基因PEBP4表达水平变化对HepG2细胞增殖的影响 | 第67-69页 |
| 4.2 基因表达水平变化对HEPG2细胞迁移的影响 | 第69-74页 |
| 4.2.1 基因BOP1表达水平变化对HepG2细胞迁移的影响 | 第69-71页 |
| 4.2.2 基因PEBP4表达水平变化对HepG2细胞迁移的影响 | 第71-74页 |
| 4.3 基因表达水平变化对HEPG2细胞凋亡的影响 | 第74-78页 |
| 4.3.1 基因BOP1表达水平变化对HepG2细胞凋亡的影响 | 第74-76页 |
| 4.3.2 基因PEBP4表达水平变化对HepG2细胞凋亡的影响 | 第76-78页 |
| 4.4 BOP1和PEBP4的过表达对PI3K/AKT信号通路的影响 | 第78-79页 |
| 4.5 小结 | 第79-81页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第81-83页 |
| 参考文献 | 第83-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 附录 | 第92-99页 |
