| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 目录 | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-18页 |
| 第一章 SMA病人尿液细胞诱导多潜能干细胞 | 第18-37页 |
| 1.1 实验材料 | 第18-23页 |
| 1.1.1 实验仪器 | 第18页 |
| 1.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第18-19页 |
| 1.1.3 质粒 | 第19-20页 |
| 1.1.4 细胞系 | 第20页 |
| 1.1.5 实验动物 | 第20页 |
| 1.1.6 主要试剂配制 | 第20-23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 1.2.1 MEFs细胞的制备 | 第23-25页 |
| 1.2.3 SMA患者尿液细胞(SMA-UCs)诱导多潜能干细胞 | 第25-27页 |
| 1.2.4 SMA-iPSCs的传代 | 第27-28页 |
| 1.2.5 SMA-iPSC的冻存和复苏 | 第28-29页 |
| 1.2.6 SMA-iPSCs表面标志物的检测 | 第29-30页 |
| 1.2.7 碱性磷酸酶检测 | 第30页 |
| 1.2.8 SMA-iPSCs细胞核型检测 | 第30页 |
| 1.3 实验结果 | 第30-34页 |
| 1.3.1 Lipofectamine2000转染HEK293T细胞 | 第30-31页 |
| 1.3.2 病毒感染SMA-UCs | 第31页 |
| 1.3.3 SMA-UCs重编程为SMA-iPSCs | 第31-32页 |
| 1.3.4 SMA-iPS克隆ES特性检测 | 第32-33页 |
| 1.3.5 SMA-iPSCs核型检测 | 第33-34页 |
| 1.4 讨论 | 第34-36页 |
| 1.5 结论 | 第36-37页 |
| 第二章 SMA打靶载体pMN-Neo的构建与打靶 | 第37-64页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-41页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第37页 |
| 2.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第37-38页 |
| 2.1.3 质粒 | 第38页 |
| 2.1.4 菌株与细胞系 | 第38页 |
| 2.1.5 引物序列 | 第38-39页 |
| 2.1.6 主要试剂配制 | 第39-41页 |
| 2.2 实验方法 | 第41-56页 |
| 2.2.1 实验方案与技术路线 | 第41页 |
| 2.2.2 载体构建示意图 | 第41-42页 |
| 2.2.3 载体构建 | 第42-52页 |
| 2.2.4 TALEN的构建 | 第52-53页 |
| 2.2.5 大抽质粒 | 第53页 |
| 2.2.6 TALEN活性验证 | 第53页 |
| 2.2.7 转染质粒酶切线性化 | 第53-54页 |
| 2.2.8 线性化质粒纯化 | 第54页 |
| 2.2.9 细胞转染 | 第54-55页 |
| 2.2.10 抗性克隆的获得 | 第55-56页 |
| 2.3 实验结果 | 第56-61页 |
| 2.3.1 质粒pMN构建结果 | 第56页 |
| 2.3.2 打靶质粒pMN-Neo构建结果 | 第56-57页 |
| 2.3.3 TALEN构建 | 第57-58页 |
| 2.3.4 pMN-Neo基因打靶 | 第58-61页 |
| 2.4 讨论 | 第61-63页 |
| 2.5 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-67页 |
| 综述 | 第67-79页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
| 攻读硕士期间主要研究成果 | 第80页 |
