| 中文摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 主要英文缩写词 | 第13-16页 |
| 第一章 文献综述 | 第16-28页 |
| 第二章 HBx调控UCA1参与肝细胞癌发生机制的研究 | 第28-74页 |
| 引言 | 第28-30页 |
| 第一节 HBx上调UCA1促进肝癌细胞增殖作用的研究 | 第30-56页 |
| 1. 材料 | 第30-33页 |
| 2. 方法 | 第33-45页 |
| 2.1 pcDNA3.1-UCA1载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.2 UCA1干扰载体的构建 | 第34-36页 |
| 2.3 细胞培养及转染 | 第36-38页 |
| 2.4 总RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.5 半定量RT-PCR及qPCR检测基因表达 | 第39-41页 |
| 2.6 CCK-8(Cell Counting Kit-8)检测细胞增殖能力 | 第41页 |
| 2.7 平板克隆形成实验 | 第41页 |
| 2.8 流式细胞仪检测细胞周期 | 第41-42页 |
| 2.9 流式细胞仪检测细胞凋亡 | 第42页 |
| 2.10 Western Blot检测基因蛋白的表达 | 第42-45页 |
| 2.11 裸鼠皮下成瘤实 | 第45页 |
| 3. 结果 | 第45-54页 |
| 3.1 验证lncRNA差异表达谱筛选候选lncRNA | 第45-46页 |
| 3.2 HBx上调了lncRNA UCA1的表达 | 第46-48页 |
| 3.2.1 HBx能够诱导UCA1的表达 | 第46-47页 |
| 3.2.2 UCA1的表达水平与HBx的诱导剂量相关 | 第47-48页 |
| 3.3 在肝癌病例组织中UCA1与HBx的表达水平正相关 | 第48-50页 |
| 3.4 UCA1促进肝细胞的增殖能力 | 第50-53页 |
| 3.4.1 UCA1加速肝癌细胞周期进程 | 第50-52页 |
| 3.4.2 干扰UCA1诱导肝癌细胞的凋亡 | 第52-53页 |
| 3.5 UCA1促进肝癌细胞在裸鼠体内的成瘤能力 | 第53-54页 |
| 4. 小结 | 第54-56页 |
| 第二节 UCA1招募EZH2抑制p27表达,激活p27Kip1/CDK2信号通路 | 第56-74页 |
| 1. 材料 | 第56-57页 |
| 2. 方法 | 第57-64页 |
| 2.1 细胞培养及细胞转染 | 第57页 |
| 2.2 半定量RT-PCR及qPCR检测基因表达 | 第57页 |
| 2.3 Western blot检测基因蛋白水平表达情况 | 第57页 |
| 2.4 肝癌细胞中UCA1在细胞核及质中的分布检测 | 第57-58页 |
| 2.5 RNA免疫沉淀(RNA Immunoprecipitation,RIP) | 第58-61页 |
| 2.6 ChIP结合qPCR法检测UCA1对p27启动子区域H3K27me3的影响 | 第61-64页 |
| 3. 结果 | 第64-72页 |
| 3.1 UCA1在细胞中的定位分析 | 第64-65页 |
| 3.2 UCA1抑制CKI p27的表达 | 第65-72页 |
| 3.2.1 HBx抑制p27表达至少部分通过UCA1 | 第65-67页 |
| 3.2.2 UCA1能物理结合EZH2 | 第67-69页 |
| 3.2.3 干扰UCA1降低EZH2在p27启动子处的结合,降低H3K27的三甲基化水平 | 第69-72页 |
| 3.3 p27表达在肝癌组织中与UCA1水平呈负相关 | 第72页 |
| 4. 小结 | 第72-74页 |
| 第三章 UCA1在肝细胞炎-癌转化过程中可能作用的研究 | 第74-90页 |
| 前言 | 第74-78页 |
| 第一节 UCA1肝癌组织中的表达分析 | 第78-80页 |
| 1. 材料 | 第78页 |
| 2. 方法 | 第78页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第78页 |
| 2.2 qPCR检测基因表达 | 第78页 |
| 3. 结果 | 第78-80页 |
| 3.1 肝癌病例中UCA1的特殊表达模式 | 第78-80页 |
| 第二节 UCA1抑制miR-122表达的机制研究 | 第80-90页 |
| 1. 材料 | 第80页 |
| 2. 方法 | 第80-82页 |
| 2.1 细胞的培养基转染 | 第80-81页 |
| 2.2 生物信息学预测可能与UCA1作用的miRNAs | 第81页 |
| 2.3 总RNA的提取 | 第81页 |
| 2.4 qPCR检测miRNA表达 | 第81-82页 |
| 2.5 比对UCA1与pri-miR-122结合的情况 | 第82页 |
| 2.6 预测miR-122是否结合CCL2 3'UTR | 第82页 |
| 3. 结果 | 第82-88页 |
| 3.1 软件预测UCA1可能作用的miRNAs | 第82页 |
| 3.2 UCA1抑制miR-122的表达 | 第82-86页 |
| 3.2.1 干扰UCA1显著上调miR-122表达 | 第83页 |
| 3.2.2 miR-122表达在肝癌组织中下调,并且肝炎组织中表达低于正常肝组织 | 第83-84页 |
| 3.2.3 干扰UCA1下调了pri-miR-122 | 第84-86页 |
| 3.3 组织中UCA1与miR-122表达水平呈负相关,与pri-miR-122表达正相关 | 第86页 |
| 3.4 miR-122抑制人CCL2表达 | 第86-87页 |
| 3.5 TGF-β能够诱导UCA1表达 | 第87-88页 |
| 4. 小结 | 第88-90页 |
| 第四章 HBx上调UCA1表达的可能机制探讨 | 第90-96页 |
| 引言 | 第90-91页 |
| 1. 材料 | 第91页 |
| 2. 方法 | 第91页 |
| 2.1 总RNA的提取 | 第91页 |
| 2.2 qPCR检测基因表达 | 第91页 |
| 2.3 预测UCA1启动子区的CpG岛 | 第91页 |
| 2.4 在线预测转录因子结合位点 | 第91页 |
| 2.5 在线查询可能的组蛋白3第27位赖氨酸的乙酰化标记 | 第91页 |
| 3. 结果 | 第91-95页 |
| 3.1 转录因子NF-kB可能不参与UCA1转录的调节 | 第91-93页 |
| 3.2 组蛋白乙酰化水平影响UCA1表达 | 第93-95页 |
| 3.2.1 UCA1启动子区存在大量H3K27ac标记 | 第93-94页 |
| 3.2.2 增加组蛋白乙酰化水平显著上调UCA1表达 | 第94-95页 |
| 3.2.3 HBx可以抑制组蛋白去乙酰化酶6的表达 | 第95页 |
| 4. 小结 | 第95-96页 |
| 讨论 | 第96-102页 |
| 结论 | 第102-103页 |
| 参考文献 | 第103-118页 |
| 致谢 | 第118-120页 |
| 作者简介 | 第120-121页 |
