| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-17页 |
| 1.1 引言 | 第11页 |
| 1.2 植物类黄酮的研究 | 第11-13页 |
| 1.2.1 类黄酮的分类 | 第11页 |
| 1.2.2 类黄酮的生物功能 | 第11-12页 |
| 1.2.3 类黄酮在植物体内的合成与代谢 | 第12-13页 |
| 1.3 转录因子与类黄酮积累 | 第13-15页 |
| 1.3.1 转录因子 | 第13-14页 |
| 1.3.2 MYB转录因子参与调控类黄酮 | 第14-15页 |
| 1.4 梨类黄酮合成研究进展 | 第15-16页 |
| 1.5 研究目的意义与研究内容 | 第16-17页 |
| 第二章 PbMYB12的克隆、生物信息学分析及亚细胞定位 | 第17-26页 |
| 2.1 材料 | 第17-18页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第17页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第17页 |
| 2.1.3 主要的试剂和仪器 | 第17页 |
| 2.1.4 培养基的配制 | 第17-18页 |
| 2.2 方法 | 第18-20页 |
| 2.2.1 RNA的提取及反转录 | 第18页 |
| 2.2.2 PbMYB12基因的克隆及序列分析 | 第18-19页 |
| 2.2.3 PbMYB12基因亚细胞定位的载体构建 | 第19页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的洋葱表皮细胞侵染 | 第19-20页 |
| 2.3 结果与分析 | 第20-24页 |
| 2.3.1 白梨PbMYB12基因全长cDNA克隆 | 第20页 |
| 2.3.2 白梨PbMYB12基因的序列分析 | 第20-22页 |
| 2.3.3 白梨PbMYB12基因的系统进化树分析 | 第22-23页 |
| 2.3.4 白梨PbMYB12基因亚细胞定位载体的构建 | 第23页 |
| 2.3.5 亚细胞定位荧光观察 | 第23-24页 |
| 2.4 讨论 | 第24-26页 |
| 第三章 PbMYB12基因的时空表达模式及与类黄酮含量的相关性 | 第26-32页 |
| 3.1 材料 | 第26-27页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 主要的试剂和仪器 | 第26页 |
| 3.1.3 引物合成 | 第26-27页 |
| 3.2 方法 | 第27-28页 |
| 3.2.1 RNA的提取和cDNA的合成 | 第27页 |
| 3.2.2 定量引物的设计与合成 | 第27页 |
| 3.2.3 实时荧光定量(RT-qPCR)反应 | 第27页 |
| 3.2.4 果皮中多酚类物质的测定 | 第27-28页 |
| 3.3 结果与分析 | 第28-30页 |
| 3.3.1 ‘早酥’和‘红早酥’不同发育期果实果皮中PbMYB12基因的表达模式 | 第28页 |
| 3.3.2 PbMYB12基因与类黄酮生物合成上游结构基因、酚类物质含量的相关性 | 第28-30页 |
| 3.4 讨论 | 第30-32页 |
| 第四章 PbMYB12的转录调控及靶基因鉴定 | 第32-48页 |
| 4.1 材料 | 第32页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第32页 |
| 4.1.2 菌株和载体 | 第32页 |
| 4.1.3 实验试剂及培养基的配制 | 第32页 |
| 4.1.4 试验仪器 | 第32页 |
| 4.2 方法 | 第32-42页 |
| 4.2.1 植物基因组DNA的提取 | 第32-33页 |
| 4.2.2 若干类黄酮合成基因启动子的克隆 | 第33-34页 |
| 4.2.3 PCR产物的连接和转化 | 第34-35页 |
| 4.2.4 启动子激活试验的载体构建 | 第35-36页 |
| 4.2.5 荧光素酶互补图像技术(Fireflyluciferasecomplementationimagingassay,LCI) | 第36-38页 |
| 4.2.6 农杆菌介导的瞬时转化烟草 | 第38-39页 |
| 4.2.7 GUS组织化学染色 | 第39-40页 |
| 4.2.8 GUS酶活性定量检测 | 第40页 |
| 4.2.9 GUS粗提液蛋白含量的测定 | 第40-41页 |
| 4.2.10 GUS荧光值的测定 | 第41-42页 |
| 4.2.11 双荧光素酶试验方法 | 第42页 |
| 4.3 结果与分析 | 第42-46页 |
| 4.3.1 候选基因和五个不同基因启动子的克隆 | 第42-43页 |
| 4.3.2 报告载体和效应载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.3.3 GUS组织化学染色 | 第44-45页 |
| 4.3.4 GUS活性定量分析 | 第45-46页 |
| 4.3.5 荧光值定量分析 | 第46页 |
| 4.4 讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 PbMYB12基因遗传转化拟南芥 | 第48-53页 |
| 5.1 材料 | 第48页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第48页 |
| 5.1.2 主要实验仪器 | 第48页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第48页 |
| 5.2 方法 | 第48-49页 |
| 5.2.1 PbMYB12基因过表达载体的构建 | 第48页 |
| 5.2.2 PbMYB12转基因拟南芥 | 第48页 |
| 5.2.3 PbMYB12转基因拟南芥的株系筛选 | 第48页 |
| 5.2.4 PbMYB12转基因拟南芥DNA水平鉴定 | 第48页 |
| 5.2.5 PbMYB12转基因拟南芥qRT-PCR检测 | 第48-49页 |
| 5.3 结果与分析 | 第49-52页 |
| 5.3.1 PbMYB12转基因拟南芥株系的筛选结果 | 第49-50页 |
| 5.3.2 PbMYB12转基因拟南芥qRT-PCR检测 | 第50-52页 |
| 5.4 讨论 | 第52-53页 |
| 第六章 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简介 | 第61页 |
