| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 引言 | 第8-23页 |
| 1.1 哺乳动物克隆研究历史 | 第8-11页 |
| 1.1.1 哺乳动物胚胎细胞克隆历史 | 第8-9页 |
| 1.1.2 哺乳动物体细胞核移植历史 | 第9页 |
| 1.1.3 异种克隆研究进展 | 第9-10页 |
| 1.1.4 治疗性克隆与人胚胎干细胞的获得 | 第10-11页 |
| 1.2 哺乳动物体细胞核移植程序与优化 | 第11-17页 |
| 1.2.1 供体细胞的准备 | 第11-12页 |
| 1.2.2 卵母细胞的采集与成熟 | 第12-14页 |
| 1.2.3 成熟卵母细胞的去核 | 第14页 |
| 1.2.4 重构胚的构建方法 | 第14-15页 |
| 1.2.5 重构胚的激活 | 第15-16页 |
| 1.2.6 重构胚的培养体系 | 第16-17页 |
| 1.2.7 胚胎移植及移植后发育 | 第17页 |
| 1.3 体细胞核移植分子机理研究现状 | 第17-22页 |
| 1.3.1 核供体细胞周期对核移植的影响 | 第17-18页 |
| 1.3.2 卵母细胞成熟度对核移植的影响 | 第18页 |
| 1.3.3 核质互作对核移植的影响 | 第18-19页 |
| 1.3.4 后生调节机制与重编程 | 第19-22页 |
| 1.3.4.1 DNA甲基化与组蛋白修饰 | 第19-20页 |
| 1.3.4.2 基因组印迹 | 第20页 |
| 1.3.4.3 X染色体失活 | 第20-21页 |
| 1.3.4.4 线粒体遗传问题 | 第21页 |
| 1.3.4.5 端粒与端粒酶 | 第21-22页 |
| 1.4 克隆动物存在的问题与未来发展 | 第22-23页 |
| 1.5 本课题研究内容与意义 | 第23页 |
| 2 实验材料与实验方法 | 第23-28页 |
| 2.1 实验试剂 | 第23页 |
| 2.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.3 实验方法 | 第24-28页 |
| 2.3.1 供体细胞的分离与培养. | 第24-25页 |
| 2.3.1.1 人包皮成纤维细胞和牛胚胎成纤维细胞的采集与原代培养 | 第24页 |
| 2.3.1.2 成纤维细胞的纯化与传代培养 | 第24页 |
| 2.3.1.3 成纤维细胞的冷冻与解冻 | 第24-25页 |
| 2.3.1.4 细胞生长曲线的绘制 | 第25页 |
| 2.3.1.5 细胞染色体核型分析 | 第25页 |
| 2.3.2 牛卵母细胞的体外成熟与孤雌激活 | 第25-27页 |
| 2.3.2.1 卵母细胞的采集 | 第25页 |
| 2.3.2.2 卵丘-卵母细胞复合体的体外成熟培养 | 第25-26页 |
| 2.3.2.3 牛卵母细胞的孤雌激活及发育培养 | 第26-27页 |
| 2.3.3 成纤维细胞与去核牛卵母细胞构建克隆胚 | 第27-28页 |
| 2.3.3.1 显微操作固定针和注射针的制作 | 第27页 |
| 2.3.3.2 核供体细胞的准备 | 第27页 |
| 2.3.3.3 显微核移植操作 | 第27-28页 |
| 2.3.3.4 重构胚的融合 | 第28页 |
| 2.3.3.5 重构胚的激活和体外培养 | 第28页 |
| 3 实验结果 | 第28-32页 |
| 3.1 人与牛成纤维细胞的原代与传代培养 | 第28页 |
| 3.2 人成纤维细胞生长曲线 | 第28-29页 |
| 3.3 人成纤维细胞核型分析 | 第29页 |
| 3.4 不同电压激活牛卵母细胞的结果 | 第29-30页 |
| 3.5 化学激活法与精子提取物激活法对牛卵母细胞的结果 | 第30页 |
| 3.6 不同融合条件对人牛重构胚的效率比较 | 第30-31页 |
| 3.7 不同融合条件对牛同种重构胚的效率比较 | 第31页 |
| 3.8 不同供体细胞处理方法对构建人牛重构胚的影响 | 第31-32页 |
| 3.9 延迟激活时间对构建人牛重构胚的影响 | 第32页 |
| 4 讨论 | 第32-36页 |
| 4.1 供体细胞的分离与培养 | 第32-33页 |
| 4.2 牛卵母细胞的体外成熟与孤雌激活 | 第33-34页 |
| 4.3 成纤维细胞与去核牛卵母细胞构建克隆胚 | 第34-36页 |
| 5 结论 | 第36-37页 |
| 致谢 | 第37-38页 |
| 参考文献 | 第38-46页 |
| 附图 | 第46-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
