| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 缩写词表 | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-30页 |
| 1 前言 | 第10-13页 |
| 1.1 人工合成 | 第11页 |
| 1.2 天然提取 | 第11-13页 |
| 2 植物AsA合成途径的研究 | 第13-19页 |
| 2.1 植物AsA的生物合成途径研究现状 | 第13-17页 |
| 2.2 编码植物AsA合成途径中各反应催化酶的基因的克隆和功能 | 第17-19页 |
| 3 植物体内AsA的分解代谢和循环再生的研究 | 第19-22页 |
| 3.1 植物体内AsA的分解代谢和循环再生途径 | 第19-22页 |
| 3.2 植物体内AsA的分解代谢和循环再生途径相关基因的克隆和功能研究 | 第22页 |
| 4 代谢工程植物提高AsA产量 | 第22-26页 |
| 4.1 促进AsA的生物合成 | 第24页 |
| 4.2 减少AsA的分解 | 第24页 |
| 4.3 提高AsA的再生 | 第24-25页 |
| 4.4 通过促进能量代谢优化AsA代谢合成 | 第25页 |
| 4.5 多基因安全转化策略 | 第25-26页 |
| 5 维生素E代谢研究 | 第26-27页 |
| 6 排名第一的蔬菜：生菜 | 第27-28页 |
| 7 结论和展望 | 第28-30页 |
| 第二章 维生素合成和代谢途径关键酶基因细胞定位 | 第30-56页 |
| 1 材料与试剂 | 第30-35页 |
| 1.1 植物材料 | 第30页 |
| 1.2 菌株 | 第30页 |
| 1.3 常用质粒载体 | 第30页 |
| 1.4 酶与试剂盒 | 第30-31页 |
| 1.5 常用试剂 | 第31-32页 |
| 1.6 常用试剂的制备 | 第32-34页 |
| 1.7 细菌和植物培养基及培养液 | 第34-35页 |
| 1.8 抗生素配制 | 第35页 |
| 2 实验方法 | 第35-47页 |
| 2.1 编码拟南芥Vc代谢途径中酶的基因的获得 | 第35-37页 |
| 2.2 目的片段的连接、载体转化和筛选 | 第37-39页 |
| 2.3 含有GFP或RFP亚克隆载体的构建 | 第39-41页 |
| 2.4 单基因植物定位表达载体的构建 | 第41-43页 |
| 2.5 农杆菌培养与转化 | 第43-44页 |
| 2.6 拟南芥的种植与转化 | 第44-46页 |
| 2.7 转基因拟南芥的分子检测 | 第46-47页 |
| 2.8 转基因拟南芥Vc含量的测定 | 第47页 |
| 2.9 激光共聚焦显微镜观察GOI-GFP表达 | 第47页 |
| 3 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.1 基因克隆 | 第47-48页 |
| 3.2 含有GFP或RFP亚克隆载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.3 拟南芥Vc合成途径基因植物定位表达载体的构建(以gldh基因的载体构建为例) | 第49-50页 |
| 3.4 转基因植株的分子检测(以转化gldh基因载体的拟南芥为例) | 第50-53页 |
| 3.5 激光共聚焦显微镜观察GOI-GFP表达 | 第53-54页 |
| 4 讨论 | 第54-56页 |
| 第三章 生菜中维生素C生物合成和代谢途径关键酶编码基因单独作用的评价 | 第56-87页 |
| 1 材料与试剂 | 第56页 |
| 2 实验方法 | 第56-64页 |
| 2.1 植物表达载体的构建 | 第56-60页 |
| 2.2 农杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第60-61页 |
| 2.3 生菜的遗传转化方法——叶盘法 | 第61-62页 |
| 2.4 转基因生菜的分子检测 | 第62-64页 |
| 3 结果 | 第64-81页 |
| 3.1 在生菜中过量表达植物维生素C合成途径基因gme | 第64-66页 |
| 3.2 在生菜中过量表达植物维生素C循环途径基因dhar | 第66-69页 |
| 3.3 在生菜中抑制表达植物维生素C代谢途径基因ao | 第69-73页 |
| 3.4 在生菜中过量表达异源血红细胞蛋白基因vhb | 第73-76页 |
| 3.5 边界四价载体：tmt,hpt,vtc2,dhar | 第76-81页 |
| 4 讨论 | 第81-87页 |
| 4.1 合成途径关键酶gme | 第81页 |
| 4.2 再生途径关键酶dhar | 第81-82页 |
| 4.3 降解途径关键酶AO | 第82-84页 |
| 4.4 细菌血红蛋白基因vhb | 第84-85页 |
| 4.5 四基因双边界载体对生菜维生素含量的改良 | 第85-87页 |
| 总结与展望 | 第87-89页 |
| 1 研究总结 | 第87-88页 |
| 2 特色和创新之处 | 第88页 |
| 3 后续研究方向 | 第88-89页 |
| 参考文献 | 第89-96页 |
| 附录 | 第96-99页 |
| 1 载体图谱 | 第96-97页 |
| 1.1 pHB植物表达载体图谱 | 第96页 |
| 1.2 pCMABIA1304植物表达载体图谱 | 第96-97页 |
| 1.3 pCAMBIA2301植物表达载体图谱 | 第97页 |
| 2 实验主要仪器设备 | 第97-99页 |
| 2.1 常规仪器设备 | 第97-98页 |
| 2.2 化学分析相关 | 第98-99页 |
| 攻读硕士学位期间发表文章情况 | 第99-100页 |
| 致谢 | 第100-101页 |
