| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 插图和附表清单 | 第12-13页 |
| 缩略语索引 | 第13-14页 |
| 第一章 引言 | 第14-19页 |
| 1.1 呼吸道合胞病毒简介 | 第14-15页 |
| 1.1.1 呼吸道合胞病毒感染 | 第14页 |
| 1.1.2 呼吸道合胞病毒基本特征 | 第14-15页 |
| 1.2 F蛋白的功能与结构 | 第15-16页 |
| 1.3 F蛋白亚单位疫苗的研究及其存在的问题 | 第16页 |
| 1.4 本文F蛋白亚单位疫苗的设计思路 | 第16-19页 |
| 1.4.1 在大肠杆菌中截短表达F蛋白 | 第16-17页 |
| 1.4.2 用Th1型免疫反应抗原以纠正F蛋白的免疫极化特性 | 第17页 |
| 1.4.3 提高F蛋白粘膜免疫性 | 第17-19页 |
| 第二章 TB10.4和F1基因的克隆 | 第19-28页 |
| 2.1 材料和方法 | 第19-24页 |
| 2.1.1 材料 | 第19-22页 |
| 2.1.2 方法 | 第22-24页 |
| 2.2 结果 | 第24-26页 |
| 2.2.1 TB10.4(Nde Ⅰ/BamH Ⅰ)基因和F1(BamH Ⅰ/Xho Ⅰ)基因的扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.2 TB10.4(Nde Ⅰ/Xho Ⅰ)基因的扩增 | 第25-26页 |
| 2.3 讨论 | 第26-27页 |
| 2.3.1 原核表达引物设计的策略 | 第26页 |
| 2.3.2 PCR扩增体系中DNA聚合酶的选择 | 第26页 |
| 2.3.3 结核分枝杆菌的TB10.4基因的扩增 | 第26-27页 |
| 2.4 小结 | 第27-28页 |
| 第三章 重组表达载体TB10.4-F1/pET30a的构建 | 第28-42页 |
| 3.1 材料和方法 | 第28-35页 |
| 3.1.1 材料 | 第28-30页 |
| 3.1.2 方法 | 第30-35页 |
| 3.2 结果 | 第35-40页 |
| 3.2.1 重组亚克隆载体的鉴定 | 第35-37页 |
| 3.2.2 重组克隆载体的鉴定 | 第37-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-41页 |
| 3.3.1 构建亚克隆载体的选择 | 第40页 |
| 3.3.2 融合蛋白基因的设计思路 | 第40-41页 |
| 3.4 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 重组融合蛋白TB10.4-F1的表达与纯化 | 第42-60页 |
| 4.1 材料和方法 | 第42-52页 |
| 4.1.1 材料 | 第42-48页 |
| 4.1.2 方法 | 第48-52页 |
| 4.2 结果 | 第52-56页 |
| 4.2.1 重组目的蛋白的表达 | 第52-53页 |
| 4.2.2 重组目的蛋白的Western-blot鉴定 | 第53-54页 |
| 4.2.3 蛋白的纯度检测 | 第54-56页 |
| 4.3 讨论 | 第56-58页 |
| 4.3.1 构建克隆载体的选择 | 第57页 |
| 4.3.2 F1蛋白的表达 | 第57-58页 |
| 4.3.3 重组目的蛋白的表达形式 | 第58页 |
| 4.3.4 融合蛋白TB10.4-F1的纯化 | 第58页 |
| 4.4 小结 | 第58-60页 |
| 第五章 重组融合蛋白TB10.4-F1的免疫原性检测 | 第60-71页 |
| 5.1 材料和方法 | 第60-65页 |
| 5.1.1 材料 | 第60-62页 |
| 5.1.2 方法 | 第62-65页 |
| 5.2 结果 | 第65-69页 |
| 5.2.1 标准曲线的绘制及其目的蛋白的定量 | 第65-66页 |
| 5.2.2 小鼠肺组织病理变化 | 第66-67页 |
| 5.2.3 小鼠特异性抗体的检测 | 第67-69页 |
| 5.3 讨论 | 第69-70页 |
| 5.3.1 免疫组小鼠血清特异性IgG变化 | 第69页 |
| 5.3.2 小鼠血清中特异性IgG1/IgG2a比值变化 | 第69-70页 |
| 5.3.3 小鼠肺部病理变化 | 第70页 |
| 5.4 小结 | 第70-71页 |
| 第六章 重组融合蛋白TB10.4-F1的安全性检测 | 第71-80页 |
| 6.1 材料和方法 | 第71-72页 |
| 6.1.1 材料 | 第71页 |
| 6.1.2 方法 | 第71-72页 |
| 6.2 结果 | 第72-77页 |
| 6.2.1 攻毒后小鼠体重变化 | 第72-73页 |
| 6.2.2 攻毒后小鼠体征变化 | 第73页 |
| 6.2.3 攻毒后小鼠Th反应极化情况检测 | 第73-74页 |
| 6.2.4 攻毒后小鼠血清IgA变化 | 第74页 |
| 6.2.5 攻毒后小鼠呼吸道中sIgA检测 | 第74-75页 |
| 6.2.6 攻毒后小鼠肺部病理变化 | 第75-77页 |
| 6.3 讨论 | 第77-78页 |
| 6.3.1 攻毒后小鼠身体表征变化 | 第77页 |
| 6.3.2 攻毒后小鼠肺表面形态及其组织病理变化 | 第77-78页 |
| 6.3.3 攻毒后小鼠Th1/Th2免疫反应分析 | 第78页 |
| 6.3.4 攻毒后小鼠肺灌洗液中sIgA分析 | 第78页 |
| 6.4 小结 | 第78-80页 |
| 第七章 全文总结 | 第80-81页 |
| 第八章 展望 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-86页 |
| 附录A | 第86-87页 |
| 一、攻读硕士期间发表论文目录 | 第86页 |
| 二、攻读硕士期间发表专利目录 | 第86页 |
| 三、攻读硕士期间参加项目情况 | 第86-87页 |
| 附录B 其他需要说明的内容 | 第87页 |
