| 致谢 | 第6-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述线粒体生物能量学与表观遗传学 | 第16-30页 |
| 1.1 引言 | 第16页 |
| 1.2 线粒体与生物能量学 | 第16-18页 |
| 1.2.1 线粒体的能量学：氧化磷酸化(OXPHOS) | 第16-17页 |
| 1.2.2 氧化磷酸化复合体和线粒体DNA | 第17-18页 |
| 1.2.3 线粒体和活性氧(ROS) | 第18页 |
| 1.3 线粒体功能障碍与疾病 | 第18-21页 |
| 1.3.1 线粒体与心脏疾病 | 第18-20页 |
| 1.3.2 线粒体与肿瘤 | 第20页 |
| 1.3.3 线粒体与代谢性疾病 | 第20-21页 |
| 1.3.4 线粒体与退行性疾病 | 第21页 |
| 1.4 能量代谢与表观遗传学 | 第21-28页 |
| 1.4.1 酵母细胞的表观遗传调控方式 | 第22-23页 |
| 1.4.2 sirtuin基因家族：依赖于NAD~+的去乙酰化酶 | 第23-26页 |
| 1.4.3 热量限制和SIRT1的表达 | 第26-28页 |
| 1.5 总结 | 第28-30页 |
| 第二章 实验研究 | 第30-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第30页 |
| 2.2 实验相关试剂 | 第30-31页 |
| 2.2.1 实验相关的酶以及抗体 | 第30页 |
| 2.2.2 培养基原料 | 第30页 |
| 2.2.3 实验相关试剂盒 | 第30页 |
| 2.2.4 其他试剂 | 第30-31页 |
| 2.3 实验试剂的配制 | 第31-38页 |
| 第三章 实验方法 | 第38-60页 |
| 3.1 相关质粒的构建 | 第38-43页 |
| 3.1.1 蜗牛酶法提取野生型酵母基因组 | 第38页 |
| 3.1.2 相关引物的设计 | 第38-39页 |
| 3.1.3 目的基因的PCR扩增 | 第39-40页 |
| 3.1.4 将目的基因克隆到TA载体 | 第40页 |
| 3.1.5 连接产物转化大肠杆菌TOP10感受态细胞 | 第40页 |
| 3.1.6 质粒的提取和鉴定 | 第40-41页 |
| 3.1.7 各种质粒的构建和鉴定 | 第41-43页 |
| 3.2 酵母菌株的构建 | 第43-45页 |
| 3.2.1 目的基因敲除菌株(W1021-7CΔ ABF2,W1021-7CA RIM1和W1021-7CΔ SLS1)的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.2 SLS1基因恢复表达(W1021-7CΔ SLS1 with pDB20-SLS1)与过表达(W1021-7C with pDB20-SLS1)菌株的构建 | 第44页 |
| 3.2.3 线粒体基因组缺失型(W1021-7Cρ~o)的构建 | 第44-45页 |
| 3.3 酵母菌株的生长状态分析 | 第45-46页 |
| 3.3.1 酵母菌株固体培养基中的生长状态 | 第45页 |
| 3.3.2 酵母菌株生长曲线 | 第45-46页 |
| 3.4 Southern杂交 | 第46-50页 |
| 3.4.1 引物探针的制备 | 第46-47页 |
| 3.4.2 DNA的转移与固定 | 第47-49页 |
| 3.4.3 杂交 | 第49页 |
| 3.4.4 免疫检测 | 第49-50页 |
| 3.4.5 DNA印记的洗脱与再杂交 | 第50页 |
| 3.5 Northern blot杂交 | 第50-54页 |
| 3.5.1 总RNA的提取 | 第50-51页 |
| 3.5.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第51页 |
| 3.5.3 转膜 | 第51-52页 |
| 3.5.4 DIG标记探针的制备 | 第52-53页 |
| 3.5.5 Northern杂交和检测 | 第53-54页 |
| 3.5.6 探针的洗脱和再杂交 | 第54页 |
| 3.6 实时定量荧光PCR(Real-time Q-PCR) | 第54-56页 |
| 3.6.1 RNA的DNase处理以及纯化 | 第54页 |
| 3.6.2 反转录成cDNA | 第54-55页 |
| 3.6.3 Q-PCR | 第55-56页 |
| 3.6.4 计算目的基因的相对表达量 | 第56页 |
| 3.7 ATP检测 | 第56-57页 |
| 3.8 Western Blot | 第57-60页 |
| 3.8.1 总蛋白的提取 | 第57页 |
| 3.8.2 SDS-PAGE电泳 | 第57-58页 |
| 3.8.3 转膜 | 第58-59页 |
| 3.8.4 抗体的杂交和检测 | 第59-60页 |
| 第四章 实验结果与分析 | 第60-82页 |
| 4.1 SLS1基因与线粒体功能和组蛋白乙酰化 | 第60-69页 |
| 4.1.1 W1021-7CΔ SLS1,W1021-7CA SLS1 with pDB20-SLS1和W1021-7Cwith pDB20-SLS1酵母菌株的生长状态分析 | 第60-62页 |
| 4.1.2 sls1基因敲除对酵母mtDNA基因组稳定性的影响 | 第62-63页 |
| 4.1.3 sls1基因敲除对酵母mtDNA基因组转录水平的影响 | 第63-64页 |
| 4.1.4 sls1基因敲除对ATP能量产生水平的影响 | 第64-65页 |
| 4.1.5 sls1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR基因家族转录水平的影响 | 第65-68页 |
| 4.1.5.1 sls1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR2转录水平的影响 | 第65-66页 |
| 4.1.5.2 sls1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR3转录水平的影响 | 第66-67页 |
| 4.1.5.3 sls1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR4转录水平的影响 | 第67-68页 |
| 4.1.6 Western Blot检测slsl基因敲除酵母细胞的组蛋白H4K16位点乙酰化程度 | 第68-69页 |
| 4.2 ABF2基因与线粒体功能和表观遗传 | 第69-75页 |
| 4.2.1 W1021-7CΔ ABF2酵母菌株的生长状态分析 | 第69-70页 |
| 4.2.2 abf2基因敲除对酵母mtDNA基因组稳定性的影响 | 第70-71页 |
| 4.2.3 abf2基因敲除对酵母mtDNA基因组转录水平的影响 | 第71-72页 |
| 4.2.4 abf2基因敲除对ATP能量产生水平的影响 | 第72-73页 |
| 4.2.5 abf2基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶复合体SIR2,SIR3和SIR4转录水平的影响 | 第73-75页 |
| 4.2.5.1 abf2基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR2转录水平的影响 | 第73-74页 |
| 4.2.5.2 abf2基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR3转录水平的影响 | 第74-75页 |
| 4.2.5.3 abf2基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR4转录水平的影响 | 第75页 |
| 4.3 RIM1基因与线粒体功能和表观遗传 | 第75-82页 |
| 4.3.1 W1021-7CΔ RIM1酵母菌株的生长状态分析 | 第76-77页 |
| 4.3.2 rim1基因敲除对酵母mtDNA基因组稳定性的影响 | 第77-78页 |
| 4.3.3 rim1基因敲除对酵母mtDNA基因组转录水平的影响 | 第78页 |
| 4.3.4 rim1基因敲除对ATP能量产生水平的影响 | 第78-79页 |
| 4.3.5 rim1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶复合体SIR2,SIR3和SIR4转录水平的影响 | 第79-82页 |
| 4.3.5.1 rim1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR2转录水平的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.5.2 rim1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR3转录水平的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.5.3 rim1基因敲除对酵母组蛋白去乙酰化酶SIR4转录水平的影响 | 第81-82页 |
| 第五章 讨论 | 第82-85页 |
| 5.1 SLS1p、ABF2p和RIM1p与线粒体基因组稳定性密切相关 | 第82-83页 |
| 5.2 线粒体功能和表观遗传学组蛋白乙酰化之间的关系 | 第83-85页 |
| 本文所用缩略词-中英文对照表 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 简历 | 第94页 |
