摘要 | 第4-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
目录 | 第7-10页 |
前言 | 第10-12页 |
1 材料和方法 | 第12-29页 |
1.1 实验材料 | 第12-15页 |
1.1.1 细胞株及试剂 | 第12-13页 |
1.1.2 主要实验设备及仪器 | 第13-14页 |
1.1.3 主要试剂的配制 | 第14-15页 |
1.2 实验方法 | 第15-29页 |
1.2.1 细胞培养 | 第15页 |
1.2.2 细胞活性测定(台盼蓝染色法) | 第15-16页 |
1.2.2.1 实验原理 | 第15页 |
1.2.2.2 实验步骤 | 第15-16页 |
1.2.3 CCK-8 | 第16页 |
1.2.3.1 实验原理 | 第16页 |
1.2.3.2 实验步骤 | 第16页 |
1.2.4 外周血单个核细胞分离 | 第16-17页 |
1.2.4.1 实验原理 | 第16-17页 |
1.2.4.2 实验步骤 | 第17页 |
1.2.5 Annexin V/PI 双标法流式细胞术检测细胞凋亡 | 第17-18页 |
1.2.5.1 实验原理 | 第17页 |
1.2.5.2 实验试剂盒 | 第17页 |
1.2.5.3 实验步骤 | 第17-18页 |
1.2.6 PI 单染色法检测细胞周期 | 第18页 |
1.2.6.1 实验原理 | 第18页 |
1.2.6.2 实验步骤 | 第18页 |
1.2.7 Hoechst33258 染色 | 第18-19页 |
1.2.8 分光光度法检测 Caspase-3 和 Caspase-9 的活性 | 第19-20页 |
1.2.8.1 实验原理 | 第19页 |
1.2.8.2 实验步骤 | 第19-20页 |
1.2.9 Western blot 检测乙酰化组蛋白 H3、H4,甲基化组蛋白 H3K9me3、H3K27me3,组蛋白去乙酰化酶 HDACS,组蛋白甲基化酶 SUV39H1 以及 EZH2 的表达11 | 第20-24页 |
1.2.9.1 实验原理 | 第20页 |
1.2.9.2 常用试剂及配制 | 第20-21页 |
1.2.9.3 取微量离心管 | 第21页 |
1.2.9.4 电泳 | 第21-22页 |
1.2.9.5 蛋白质转移实验 | 第22页 |
1.2.9.6 丽春红染色观察硝酸纤维素滤膜蛋白质转移情况 | 第22-23页 |
1.2.9.7 抗体与靶蛋白的结合反应 | 第23页 |
1.2.9.8 第一抗体与硝酸纤维素滤膜共温育 | 第23页 |
1.2.9.9 第二抗体与硝酸纤维素滤膜温育 | 第23页 |
1.2.9.10 ECL 化学发光法检测结果 | 第23-24页 |
1.2.9.11 结果处理 | 第24页 |
1.2.10 激光共聚焦显微镜检测 HDACS、Suv39H1 和 EZH2 蛋白的亚细胞定位和表达 | 第24-25页 |
1.2.10.1 实验原理 | 第24页 |
1.2.10.2 实验步骤 | 第24-25页 |
1.2.11 Real-time/RT-PCR 检测 SUV39Hl 和 EZH2 的 mRNA 水平 | 第25-26页 |
1.2.11.1 实验原理 | 第25页 |
1.2.11.2 常用试剂准备 | 第25页 |
1.2.11.3 实验步骤 | 第25-26页 |
1.2.11.4 实时荧光定量 PCR 反应 | 第26页 |
1.2.11.5 计算方法 | 第26页 |
1.2.12 RT-PCR 检测 HDACS 的 mRNA 水平 | 第26-28页 |
1.2.12.1 实验原理 | 第26-27页 |
1.2.12.2 常用试剂准备 | 第27页 |
1.2.12.3 实验步骤 | 第27-28页 |
1.2.13 统计学处理 | 第28-29页 |
2 实验结果 | 第29-41页 |
2.1 槲皮素对 NB4 细胞增殖的影响 | 第29-30页 |
2.2 槲皮素对正常人外周血单个核细胞增殖影响 | 第30页 |
2.3 槲皮素对 NB4 细胞凋亡的影响 | 第30-33页 |
2.4 槲皮素对 NB4 细胞增殖周期的影响 | 第33-34页 |
2.5 槲皮素对 NB4 细胞组蛋白 H3、H4 乙酰化水平及 H3 甲基化水平的影响 | 第34-36页 |
2.6 槲皮素对 NB4 细胞 HDACS 表达的调控作用 | 第36-37页 |
2.7 槲皮素对 NB4 细胞组蛋白甲基化酶的影响 | 第37-41页 |
3 讨论 | 第41-43页 |
4 小结 | 第43-44页 |
参考文献 | 第44-48页 |
综述 | 第48-56页 |
参考文献 | 第53-56页 |
附录 | 第56-57页 |
致谢 | 第57页 |