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槲皮素对白血病表观遗传修饰的机制研究

摘要第4-5页
Abstract第5-6页
目录第7-10页
前言第10-12页
1 材料和方法第12-29页
    1.1 实验材料第12-15页
        1.1.1 细胞株及试剂第12-13页
        1.1.2 主要实验设备及仪器第13-14页
        1.1.3 主要试剂的配制第14-15页
    1.2 实验方法第15-29页
        1.2.1 细胞培养第15页
        1.2.2 细胞活性测定(台盼蓝染色法)第15-16页
            1.2.2.1 实验原理第15页
            1.2.2.2 实验步骤第15-16页
        1.2.3 CCK-8第16页
            1.2.3.1 实验原理第16页
            1.2.3.2 实验步骤第16页
        1.2.4 外周血单个核细胞分离第16-17页
            1.2.4.1 实验原理第16-17页
            1.2.4.2 实验步骤第17页
        1.2.5 Annexin V/PI 双标法流式细胞术检测细胞凋亡第17-18页
            1.2.5.1 实验原理第17页
            1.2.5.2 实验试剂盒第17页
            1.2.5.3 实验步骤第17-18页
        1.2.6 PI 单染色法检测细胞周期第18页
            1.2.6.1 实验原理第18页
            1.2.6.2 实验步骤第18页
        1.2.7 Hoechst33258 染色第18-19页
        1.2.8 分光光度法检测 Caspase-3 和 Caspase-9 的活性第19-20页
            1.2.8.1 实验原理第19页
            1.2.8.2 实验步骤第19-20页
        1.2.9 Western blot 检测乙酰化组蛋白 H3、H4,甲基化组蛋白 H3K9me3、H3K27me3,组蛋白去乙酰化酶 HDACS,组蛋白甲基化酶 SUV39H1 以及 EZH2 的表达11第20-24页
            1.2.9.1 实验原理第20页
            1.2.9.2 常用试剂及配制第20-21页
            1.2.9.3 取微量离心管第21页
            1.2.9.4 电泳第21-22页
            1.2.9.5 蛋白质转移实验第22页
            1.2.9.6 丽春红染色观察硝酸纤维素滤膜蛋白质转移情况第22-23页
            1.2.9.7 抗体与靶蛋白的结合反应第23页
            1.2.9.8 第一抗体与硝酸纤维素滤膜共温育第23页
            1.2.9.9 第二抗体与硝酸纤维素滤膜温育第23页
            1.2.9.10 ECL 化学发光法检测结果第23-24页
            1.2.9.11 结果处理第24页
        1.2.10 激光共聚焦显微镜检测 HDACS、Suv39H1 和 EZH2 蛋白的亚细胞定位和表达第24-25页
            1.2.10.1 实验原理第24页
            1.2.10.2 实验步骤第24-25页
        1.2.11 Real-time/RT-PCR 检测 SUV39Hl 和 EZH2 的 mRNA 水平第25-26页
            1.2.11.1 实验原理第25页
            1.2.11.2 常用试剂准备第25页
            1.2.11.3 实验步骤第25-26页
            1.2.11.4 实时荧光定量 PCR 反应第26页
            1.2.11.5 计算方法第26页
        1.2.12 RT-PCR 检测 HDACS 的 mRNA 水平第26-28页
            1.2.12.1 实验原理第26-27页
            1.2.12.2 常用试剂准备第27页
            1.2.12.3 实验步骤第27-28页
        1.2.13 统计学处理第28-29页
2 实验结果第29-41页
    2.1 槲皮素对 NB4 细胞增殖的影响第29-30页
    2.2 槲皮素对正常人外周血单个核细胞增殖影响第30页
    2.3 槲皮素对 NB4 细胞凋亡的影响第30-33页
    2.4 槲皮素对 NB4 细胞增殖周期的影响第33-34页
    2.5 槲皮素对 NB4 细胞组蛋白 H3、H4 乙酰化水平及 H3 甲基化水平的影响第34-36页
    2.6 槲皮素对 NB4 细胞 HDACS 表达的调控作用第36-37页
    2.7 槲皮素对 NB4 细胞组蛋白甲基化酶的影响第37-41页
3 讨论第41-43页
4 小结第43-44页
参考文献第44-48页
综述第48-56页
    参考文献第53-56页
附录第56-57页
致谢第57页

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