| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略语/符号说明 | 第11-12页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 研究现状、成果 | 第12-13页 |
| 研究目的、方法 | 第13-14页 |
| 一、筛选PTHrP稳定敲降的MDA-MB-231细胞 | 第14-40页 |
| 1.1 对象和方法 | 第14-31页 |
| 1.1.1 慢病毒穿梭质粒的构建 | 第14-23页 |
| 1.1.2 慢病毒的包装 | 第23-24页 |
| 1.1.3 慢病毒收集 | 第24页 |
| 1.1.4 慢病毒滴度检测 | 第24-25页 |
| 1.1.5 有效慢病毒的筛选 | 第25-30页 |
| 1.1.6 PTHrP稳筛MDA-MB231细胞实验 | 第30-31页 |
| 1.2 结果 | 第31-39页 |
| 1.2.1 MDA-MB-231细胞病毒侵染结果 | 第31-35页 |
| 1.2.2 药物筛选稳定敲降PTHrP的MDA-MB-231细胞实验结果 | 第35-39页 |
| 1.3 讨论 | 第39页 |
| 1.4 小结 | 第39-40页 |
| 二、乳腺癌细胞分泌的PTHrP抑制成骨作用 | 第40-67页 |
| 2.1 对象和方法 | 第40-55页 |
| 2.1.1 实验中所用仪器 | 第40-42页 |
| 2.1.2 实验中所用试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 实验中所用工作液/储存液配置方法 | 第43-47页 |
| 2.1.4 实验中所用耗材及器械 | 第47-48页 |
| 2.1.5 实验中所用实验方法 | 第48-55页 |
| 2.2 结果 | 第55-65页 |
| 2.2.1 重组细胞因子PTHrP对成骨细胞系MC-4的分化抑制作用 | 第55-56页 |
| 2.2.2 MDA-MB-231条件培养基(CM)对成骨细胞系MC-4及原代BMSC的分化抑制作用 | 第56-58页 |
| 2.2.3 NC/995/996条件培养基(CM)对成骨细胞系MC-4及原代BMSC的分化抑制作用差异 | 第58-59页 |
| 2.2.4 NC/995/996条件培养基(CM)对成骨细胞系MC-4及原代BMSC的矿化程度抑制作用的差异 | 第59-61页 |
| 2.2.5 NC/995/996条件培养基(CM)对原代BMSC ALP活性抑制的差异 | 第61-62页 |
| 2.2.6 Blank/NC/995/996裸鼠胫骨内注射实验结果 | 第62-65页 |
| 2.3 讨论 | 第65-66页 |
| 2.3.1 PTHrP抑制成骨机制 | 第65-66页 |
| 2.3.2 临床意义 | 第66页 |
| 2.4 小结 | 第66-67页 |
| 三、乳腺癌细胞分泌的PTHrP激活破骨作用 | 第67-79页 |
| 3.1 对象和方法 | 第67-71页 |
| 3.1.1 实验中所用仪器详见2.1.1 | 第67页 |
| 3.1.2 实验中所用试剂 | 第67-68页 |
| 3.1.3 实验中所用工作液/储存液配置方法 | 第68-69页 |
| 3.1.4 实验中所用耗材及器械 | 第69页 |
| 3.1.5 实验中所用实验方法 | 第69-71页 |
| 3.2 结果 | 第71-78页 |
| 3.2.1 NC/995/996条件培养基激活破骨细胞的差异 | 第71-72页 |
| 3.2.2 NC/995/996条件培养基激活破骨细胞差异的Trap染色结果 | 第72-73页 |
| 3.2.3 Blank/NC/995/996裸鼠胫骨内注射实验结果 | 第73-75页 |
| 3.2.4 NC/995/996细胞内源性IL-6相对表达量的差异及PTHrP对IL-6启动子活性的调节作用 | 第75-78页 |
| 3.3 讨论 | 第78页 |
| 3.3.1 PTHrP激活破骨机制 | 第78页 |
| 3.3.2 临床意义 | 第78页 |
| 3.4 小结 | 第78-79页 |
| 四、乳腺癌分泌的PTHrP对自身生长的调节作用 | 第79-101页 |
| 4.1 对象和方法 | 第79-89页 |
| 4.1.1 实验中所用仪器详见2.1.1 | 第79页 |
| 4.1.2 实验中所用试剂 | 第79-80页 |
| 4.1.3 实验中所用工作液/储存液配置 | 第80-82页 |
| 4.1.4 实验中所用耗材 | 第82-83页 |
| 4.1.5 实验中所用实验方法 | 第83-89页 |
| 4.2 结果 | 第89-99页 |
| 4.2.1 NC/995/996细胞体外生长曲线 | 第89页 |
| 4.2.2 NC/995/996细胞体内成瘤图 | 第89-91页 |
| 4.2.3 NC/995/996细胞裸鼠皮下成瘤瘤体石蜡切片HE染色 | 第91-92页 |
| 4.2.4 NC/995/996细胞PI染色细胞周期分析图 | 第92-95页 |
| 4.2.5 NC/995/996与细胞周期,凋亡,自噬作用相关的细胞内源性蛋白相对表达差异及透射电镜照片 | 第95-96页 |
| 4.2.6 PTHrP对NC/995/996细胞内源性IL-6和PTHrP的调节 | 第96-97页 |
| 4.2.7 PTHrP中和抗体对NC细胞中PTHrP相对表达量的调节作用 | 第97-98页 |
| 4.2.8 NC/995/996细胞Tunnel染色检测细胞凋亡 | 第98-99页 |
| 4.3 讨论 | 第99-100页 |
| 4.3.1 PTHrP抑制凋亡及自噬作用的机制 | 第99页 |
| 4.3.2 临床意义 | 第99-100页 |
| 4.4 小结 | 第100-101页 |
| 全文结论 | 第101-103页 |
| 论文创新点 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-115页 |
| 参加科研情况说明 | 第115-116页 |
| 综述 乳腺癌骨转移研究进展 | 第116-123页 |
| 综述参考文献 | 第120-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
