| 中文摘要 | 第5-7页 |
| 英文摘要 | 第7-8页 |
| 符号说明 | 第13-14页 |
| 1 前言 | 第14-18页 |
| 2 材料和方法 | 第18-40页 |
| 2.1 材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第18页 |
| 2.1.2 细胞培养所用材料 | 第18页 |
| 2.1.3 质粒 | 第18页 |
| 2.1.4 试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.5 酶类 | 第19页 |
| 2.1.6 引物及探针 | 第19-20页 |
| 2.1.7 抗体 | 第20页 |
| 2.1.8 实验用裸鼠 | 第20页 |
| 2.1.9 组织切片所需材料 | 第20-21页 |
| 2.1.10 组织芯片 | 第21页 |
| 2.1.11 主要实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.2 方法 | 第22-40页 |
| 2.2.1 稳定过表达miR-126结肠癌细胞系HCT116及稳定沉默miR-126结肠癌细胞系SW480的构建 | 第22-33页 |
| 2.2.2 裸鼠皮下、尾静脉成瘤实验 | 第33-35页 |
| 2.2.3 realtime PCR检测稳定过表达及沉默miR-126结肠癌细胞系中CXCR4、RhoA信号通路相关分子的表达 | 第35-36页 |
| 2.2.4 原位杂交检测人结肠癌组织芯片中miR-126的表达 | 第36-37页 |
| 2.2.5 免疫组化技术检测人结肠癌组织芯片中RhoA通路重要分子的表达 | 第37-39页 |
| 2.2.6 统计学分析 | 第39-40页 |
| 3 结果 | 第40-86页 |
| 3.1 稳定过表达rniR-126结肠癌细胞系HCT116及稳定沉默miR-126结肠癌细胞系SW480的构建 | 第40-51页 |
| 3.1.1 稳定过表达miR-126质粒的构建 | 第40-41页 |
| 3.1.2 稳定沉默miR-126质粒的构建 | 第41-43页 |
| 3.1.3 慢病毒包装成功鉴定 | 第43页 |
| 3.1.4 慢病毒的滴度测定 | 第43-44页 |
| 3.1.5 稳定过表达miR-126慢病毒感染HCT116后的荧光表达 | 第44-45页 |
| 3.1.6 稳定沉默miR-126慢病毒感染SW480后的荧光表达 | 第45-46页 |
| 3.1.7 流式细胞仪分选慢病毒感染后GFP阳性的HCT116、SW480细胞 | 第46-49页 |
| 3.1.8 realtime PCR鉴定慢病毒感染后HCT116、SW480中miR-126的表达 | 第49-51页 |
| 3.2 裸鼠皮下成瘤、尾静脉成瘤实验结果 | 第51-58页 |
| 3.2.1 裸鼠皮下成瘤实验结果 | 第51-55页 |
| 3.2.2 裸鼠尾静脉成瘤实验结果 | 第55-58页 |
| 3.3 realtime PCR检测稳定过表达及沉默miR-126结肠癌细胞系中CXCR4及RhoA信号通路重要分子的表达 | 第58-60页 |
| 3.3.1 realtime PCR检测稳定过表达miR-126细胞系HCT116及其对照组细胞中CXCR4及RhoA信号通路分子表达 | 第58页 |
| 3.3.2 realtime PCR检测稳定沉默miR-126细胞系SW480及对照组细胞中CXCR4及RhoA信号通路分子表达 | 第58-60页 |
| 3.4 原位杂交检测人结肠癌组织芯片中miR-126的表达 | 第60-62页 |
| 3.5 免疫组化检测人结肠癌组织芯片中CXCR4及RhoA信号通路重要分子的表达 | 第62-86页 |
| 3.5.1 CXCR4蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第63-65页 |
| 3.5.2 RhoA蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第65-67页 |
| 3.5.3 RhoGAP蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第67-69页 |
| 3.5.4 RhoGEF蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第69-71页 |
| 3.5.5 ROCK蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第71-73页 |
| 3.5.6 PAK1蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第73-75页 |
| 3.5.7 PKN1蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第75-77页 |
| 3.5.8 PI3K蛋白在结肠癌和癌旁正常粘膜中的表达 | 第77-79页 |
| 3.5.9 结肠癌组织中miR-126及CXCR4、RhoA通路重要分子的表达对结肠癌患者生存时间的影响的分析 | 第79-82页 |
| 3.5.10 结肠癌组织中miR-126的表达与CXCR4及RhoA通路重要分子的表达的相关性分析 | 第82-84页 |
| 3.5.11 结肠癌组织中CXCR4的表达与RhoA通路重要分子的表达的相关性分析 | 第84-86页 |
| 4 讨论 | 第86-100页 |
| 4.1 利用慢病毒载体构建miR-126稳定过表达及沉默结肠癌细胞系HCT116、SW480 | 第87-88页 |
| 4.2 稳定过表达及沉默miR-126的结肠癌细胞系裸鼠皮下成瘤、尾静脉成瘤实验 | 第88-90页 |
| 4.2.1 稳定过表达及沉默miR-126的结肠癌细胞系裸鼠皮下成瘤实验 | 第88-89页 |
| 4.2.2 稳定过表达及沉默miR-126的结肠癌细胞系裸鼠尾静脉成瘤实验 | 第89-90页 |
| 4.3 realtime PCR检测稳定过表达及沉默miR-126结肠癌细胞系中CXCR4、RhoA信号通路重要分子的表达 | 第90-91页 |
| 4.4 原位杂交技术检测人结肠癌组织芯片中miR-126的表达 | 第91-92页 |
| 4.5 免疫组化技术检测人结肠癌组织芯片中CXCR4及RhoA通路重要分子的表达 | 第92-98页 |
| 4.5.1 CXCR4 | 第93页 |
| 4.5.2 RhoA | 第93-94页 |
| 4.5.3 RhoGAP | 第94-95页 |
| 4.5.4 RhoGEF | 第95页 |
| 4.5.5 ROCK | 第95-96页 |
| 4.5.6 PAK1 | 第96页 |
| 4.5.7 PKN1 | 第96-97页 |
| 4.5.8 PI3K | 第97页 |
| 4.5.9 结肠癌组织中miR-126及CXCR4、RhoA通路重要分子的表达对结肠癌患者生存时间的影响的分析 | 第97-98页 |
| 4.5.10 结肠癌组织中miR-126的表达与CXCR4及RhoA通路重要分子的表达的相关性分析 | 第98页 |
| 4.5.11 结肠癌组织中CXCR4的表达与RhoA通路重要分子的表达的相关性分析 | 第98页 |
| 总结 | 第98-100页 |
| 5 结论 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-111页 |
| 综述 | 第111-122页 |
| 参考文献 | 第117-122页 |
| 攻读学位期间主要的研究成果 | 第122-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
