| 摘要 | 第9-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-46页 |
| 一、猪圆环病毒2型研究进展 | 第16-24页 |
| 1 病原学 | 第16-18页 |
| 1.1 猪圆环病毒的基因组结构和分型 | 第16-17页 |
| 1.2 PCV2病毒粒子的结构及理化特性 | 第17页 |
| 1.3 PCV2的基因组结构及其编码蛋白的生物学功能 | 第17-18页 |
| 2 流行病学 | 第18-19页 |
| 2.1 PCV2流行状况与病毒变异 | 第18-19页 |
| 2.2 易感动物 | 第19页 |
| 2.3 传播方式 | 第19页 |
| 3 致病机理 | 第19-23页 |
| 3.1 淋巴组织消失和免疫抑制 | 第19-20页 |
| 3.2 PCV2感染和细胞凋亡 | 第20页 |
| 3.3 免疫刺激对PCVAD的影响 | 第20-21页 |
| 3.4 PCV2与免疫系统的相互作用 | 第21-23页 |
| 4 PCV2引起的临床疾病 | 第23-24页 |
| 4.1 PCVAD | 第23页 |
| 4.2 PCV2与其他病原共感染 | 第23-24页 |
| 二、内质网应激和未折叠蛋白反应研究进展 | 第24-45页 |
| 1 未折叠蛋白反应的分子机制 | 第24-28页 |
| 1.1 UPR感受器 | 第25-27页 |
| 1.2 UPR的动态调节 | 第27-28页 |
| 2 未折叠蛋白反应的生物学功能 | 第28-31页 |
| 2.1 UPR在细胞生存与死亡中的作用 | 第29-30页 |
| 2.2 UPR的其他生物学功能 | 第30-31页 |
| 3 内质网应激的检测方法 | 第31-34页 |
| 3.1 XBP1 mRNA的剪切 | 第32页 |
| 3.2 UPR标记分子mRNA水平的检测 | 第32页 |
| 3.3 UPR标记分子的免疫印迹和免疫组织化学检测 | 第32页 |
| 3.4 XBP1和ATF6报告基因检测 | 第32-33页 |
| 3.5 荧光显微镜观察IRE1活性和ATF6亚细胞定位 | 第33页 |
| 3.6 转基因小鼠模型 | 第33-34页 |
| 4 内质网应激与凋亡和自噬的联系 | 第34-42页 |
| 4.1 内质网应激与凋亡的联系 | 第34-39页 |
| 4.2 内质网应激与自噬的联系 | 第39-42页 |
| 5 病毒感染与内质网应激和未折叠蛋白反应 | 第42-45页 |
| 5.1 引起内质网应激的病毒及其蛋白的特点 | 第42-43页 |
| 5.2 病毒感染激活UPR | 第43页 |
| 5.3 病毒感染抑制UPR | 第43-44页 |
| 5.4 病毒引起的内质网应激与凋亡之间的联系 | 第44-45页 |
| 三、本研究拟探索的科学问题 | 第45-46页 |
| 第二部分 试验研究 | 第46-96页 |
| 第一章 PCV2感染诱导PK-15细胞内质网应激 | 第47-64页 |
| 1 材料与方法 | 第48-54页 |
| 1.1 材料 | 第48-49页 |
| 1.2 表达病毒编码蛋白的真核表达载体的构建 | 第49-51页 |
| 1.3 转染 | 第51页 |
| 1.4 病毒感染和药物处理 | 第51页 |
| 1.5 免疫印迹 | 第51-52页 |
| 1.6 细胞总RNA的提取 | 第52-53页 |
| 1.7 反转录 | 第53页 |
| 1.8 XBP1剪切试验 | 第53-54页 |
| 1.9 统计分析 | 第54页 |
| 2 结果 | 第54-61页 |
| 2.1 PK-15细胞可以发生内质网应激 | 第54-55页 |
| 2.2 PCV2感染PK-15细胞选择性激活PERK通路 | 第55页 |
| 2.3 PCV2感染PK-15细胞后激活PERK/eIF2α/ATF4/CHOP通路 | 第55-58页 |
| 2.4 PCV2感染猪肺泡巨噬细胞选择性激活PERK通路 | 第58-59页 |
| 2.5 PCV2 Rep和Cap蛋白诱导UPR | 第59-61页 |
| 3 讨论 | 第61-64页 |
| 第二章 PCV2利用PERK通路和GRP78增强其复制 | 第64-81页 |
| 1 材料与方法 | 第65-69页 |
| 1.1 材料 | 第65-66页 |
| 1.2 真核表达载体的构建 | 第66页 |
| 1.3 转染 | 第66-67页 |
| 1.4 病毒感染与药物处理 | 第67页 |
| 1.5 免疫印迹 | 第67-68页 |
| 1.6 间接免疫荧光 | 第68页 |
| 1.7 细胞活力检测 | 第68-69页 |
| 1.8 统计分析 | 第69页 |
| 2 结果 | 第69-78页 |
| 2.1 抑制PERK可以降低PCV2的复制 | 第69-71页 |
| 2.2 抑制eIF2α去磷酸化可以降低PCV2的复制 | 第71-72页 |
| 2.3 分子伴侣GRP78增强PCV2的复制 | 第72-75页 |
| 2.4 化学分子伴侣对PCV2复制的影响 | 第75-77页 |
| 2.5 内质网应激诱导剂抑制PCV2的复制 | 第77-78页 |
| 3 讨论 | 第78-81页 |
| 第三章 PCV2感染通过内质网应激诱导PK-15细胞凋亡的机制 | 第81-96页 |
| 1 材料与方法 | 第82-85页 |
| 1.1 材料 | 第82-83页 |
| 1.2 真核表达载体的构建 | 第83页 |
| 1.3 转染 | 第83页 |
| 1.4 病毒感染与药物处理 | 第83页 |
| 1.5 Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡 | 第83-84页 |
| 1.6 TUNEL法检测细胞凋亡 | 第84页 |
| 1.7 荧光能量共振转移法检测蛋白互作 | 第84-85页 |
| 1.8 免疫印迹 | 第85页 |
| 1.9 细胞活力检测 | 第85页 |
| 1.10 统计分析 | 第85页 |
| 2 结果 | 第85-93页 |
| 2.1 PCV2感染引起PK-15细胞凋亡 | 第85-86页 |
| 2.2 化学分子伴侣能减少PCV2引起的凋亡 | 第86-87页 |
| 2.3 抑制PERK或者IP3R能减少PCV2引起的凋亡 | 第87-89页 |
| 2.4 PCV2 Cap蛋白能通过PERK/CHOP/Bcl-2通路诱导凋亡 | 第89页 |
| 2.5 PCV2感染能够使Bcl-2/Beclinl复合体解离 | 第89-93页 |
| 3 讨论 | 第93-96页 |
| 结论 | 第96-97页 |
| 创新性 | 第97-98页 |
| 展望 | 第98-99页 |
| 缩略词表 | 第99-100页 |
| 参考文献 | 第100-111页 |
| 作者简介 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113页 |
