| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-26页 |
| 第一章 脂肪细胞分化 | 第13-20页 |
| ·脂肪细胞的起源 | 第13-14页 |
| ·脂肪细胞分化的过程 | 第14页 |
| ·脂肪细胞分化的调控 | 第14-20页 |
| ·PPARγ | 第14-15页 |
| ·C/EBPs | 第15-17页 |
| ·Wnt 和β-catenin | 第17页 |
| ·细胞周期蛋白 | 第17-18页 |
| ·其他因子 | 第18-19页 |
| ·结论 | 第19-20页 |
| 第二章 Sirt2 在脂肪细胞分化中的作用 | 第20-26页 |
| ·Sirt2 的研究进展 | 第20-24页 |
| ·去乙酰化酶Sirt2 的结构、表达及定位 | 第20-21页 |
| ·Sirt2 的作用因子 | 第21-22页 |
| ·Sirt2 的功能 | 第22-24页 |
| ·Sirt2 在脂肪组织中的生物学功能 | 第24-26页 |
| ·Sirt2 和脂肪细胞的分化 | 第24页 |
| ·Sirt2 与脂解 | 第24页 |
| ·结论 | 第24-26页 |
| 实验研究 | 第26-55页 |
| 第三章 猪Sirt2 全长CDNA 序列的克隆 | 第26-32页 |
| ·材料 | 第26-27页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·试剂和仪器 | 第26页 |
| ·主要仪器 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-28页 |
| ·总RNA 的提取 | 第27页 |
| ·反转录 | 第27页 |
| ·PCR 扩增 | 第27页 |
| ·PCR 扩增产物检测 | 第27页 |
| ·扩增产物的分离和克隆 | 第27-28页 |
| ·克隆产物的鉴定 | 第28页 |
| ·序列分析 | 第28页 |
| ·结果 | 第28-31页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第28-29页 |
| ·Sirt2 扩增退火温度的确定 | 第29页 |
| ·菌液PCR 鉴定 | 第29页 |
| ·重组质粒的PCR 初步鉴定 | 第29-30页 |
| ·克隆测序结果及GenBank 登陆 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-32页 |
| 第四章 剪接突变体Sirt2 T的发现及其特征分析 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·实验动物 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·实验仪器及器械 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-34页 |
| ·主要溶液配制 | 第33页 |
| ·生物信息学分析 | 第33页 |
| ·真核表达载体pEGFP-C1-Sirt2T 的构建 | 第33页 |
| ·猪脂肪细胞原代培养和瞬时转染 | 第33页 |
| ·RT-PCR | 第33-34页 |
| ·免疫荧光 | 第34页 |
| ·结果 | 第34-39页 |
| ·生物信息学分析 | 第34-37页 |
| ·猪Sirt2 组织特异性表达 | 第37页 |
| ·猪脂肪分化过程中Sirt2 的时序表达 | 第37-38页 |
| ·亚细胞定位 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 第五章 Sirt2 腺病毒超表达载体的构建 | 第41-49页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-45页 |
| ·主要试剂的配制 | 第41页 |
| ·腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV-Sirt2 的构建 | 第41-43页 |
| ·重组腺病毒骨架载体pAd-Sirt2 的构建 | 第43页 |
| ·重组腺病毒vAd-Sirt2 的产生 | 第43-45页 |
| ·结果 | 第45-48页 |
| ·重组腺病毒载体的构建过程 | 第45页 |
| ·pAdTrack-CMV-Sirt2 穿梭载体及重组腺病毒pAd-Sirt2 的鉴定 | 第45-46页 |
| ·重组阳性克隆株的PCR 鉴定 | 第46-47页 |
| ·重组腺病毒的包装及滴度测定 | 第47页 |
| ·病毒PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-49页 |
| 第六章 过表达Sirt2 对猪前体脂肪细胞分化的作用及分子机制 | 第49-55页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-51页 |
| ·主要试剂的配制 | 第50页 |
| ·猪脂肪细胞原代培养及病毒感染 | 第50页 |
| ·Sirt2 目的蛋白的鉴定 | 第50页 |
| ·油红O 染色法检测猪前体脂肪细胞的分化 | 第50页 |
| ·Realtime PCR 检测 Sirt2、PPARγ、aP2、C/EBPα 和 PGC-1β mRNA 水平表达变化 | 第50-51页 |
| ·Western Blot 检测PPARγ、aP2 和C/EBPα蛋白水平表达变化 | 第51页 |
| ·IP 检测Sirt2 和PGC-1β蛋白相互作用 | 第51页 |
| ·数据统计 | 第51页 |
| ·结果 | 第51-54页 |
| ·Sirt2 蛋白在猪前体脂肪细胞中表达 | 第51页 |
| ·油红O 染色法检测猪前体脂肪细胞的分化 | 第51-52页 |
| ·Realtime PCR 检测 Sirt2、PPARγ、aP2、C/EBPα 和 PGC-1β mRNA 水平表达变化 | 第52-53页 |
| ·Western Blot 检测PPARγ、aP2、C/EBPα蛋白水平表达变化 | 第53页 |
| ·IP 检测Sirt2 与PGC-1β的相互作用 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 附录 | 第63-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 作者简介 | 第71页 |
