| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第9-19页 |
| 1.1 海水养殖中的弧菌 | 第9-10页 |
| 1.1.1 溶藻弧菌 | 第9-10页 |
| 1.1.2 哈维氏弧菌 | 第10页 |
| 1.2 III型分泌系统 | 第10-14页 |
| 1.2.1 T3SS“针状样”装置的结构 | 第11页 |
| 1.2.2 T3SS的侵染 | 第11-14页 |
| 1.3 弧菌的病害防治 | 第14-15页 |
| 1.4 蛋白质组学在海洋生物中的研究进展 | 第15-17页 |
| 1.5 技术路线 | 第17-18页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 溶藻弧菌vscP和vscX基因的克隆和荧光定量PCR | 第19-37页 |
| 2.1 材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂和实验仪器 | 第19-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 细菌总DNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.2 vscP和vscX基因的克隆 | 第21页 |
| 2.2.3 目的片段的连接，转化和测序 | 第21-22页 |
| 2.2.4 生物信息学分析 | 第22页 |
| 2.2.5 荧光定量PCR | 第22-24页 |
| 2.3 结果 | 第24-34页 |
| 2.3.1 vscP基因的克隆分析 | 第24-30页 |
| 2.3.2 vscX基因的克隆分析 | 第30-34页 |
| 2.3.3 RT-PCR | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-37页 |
| 3 溶藻弧菌VscP蛋白的免疫原性和免疫保护性分析 | 第37-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第37-38页 |
| 3.1.1 菌株与质粒载体 | 第37页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第38页 |
| 3.1.4 实验鱼体 | 第38页 |
| 3.2 方法 | 第38-41页 |
| 3.2.1 原核表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.2 VscP蛋白表达条件的优化 | 第39页 |
| 3.2.3 VscP蛋白的纯化与定量 | 第39-40页 |
| 3.2.4 VscP蛋白对多鳞鱚的免疫保护率 | 第40-41页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第41-45页 |
| 3.3.1 vscP基因的原核表达 | 第41-44页 |
| 3.3.2 VscP蛋白对多鳞鱚的免疫保护性分析 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-47页 |
| 4 Vsc P蛋白免疫多鳞鱚脾脏蛋白质组学初步分析 | 第47-54页 |
| 4.1 实验材料 | 第47页 |
| 4.1.1 主要仪器 | 第47页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-49页 |
| 4.2.1 蛋白质样品制备 | 第47-48页 |
| 4.2.2 蛋白质的纯化与定量 | 第48页 |
| 4.2.3 双向电泳 | 第48-49页 |
| 4.3 结果 | 第49-52页 |
| 4.3.1 对照组与免疫组脾脏SDS-PAGE比较 | 第49页 |
| 4.3.2 VscP免疫多鳞鱚脾脏蛋白的 2-DE图谱 | 第49-52页 |
| 4.4 讨论 | 第52-54页 |
| 5 结论 | 第54-55页 |
| 5.1 溶藻弧菌T3SS“针状样”毒力装置相关基因的克隆和生物信息学分析 | 第54页 |
| 5.2 溶藻弧菌T3SS“分子尺”VscP蛋白的表达和免疫保护 | 第54页 |
| 5.3 VscP蛋白免疫多鳞鱚脾脏蛋白质组学初步分析 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简历 | 第64-65页 |
| 导师简介 | 第65页 |
