| 中文摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 引言 | 第12-14页 |
| 第一章 树鼩原代肝细胞的分离纯化、培养及鉴定 | 第14-30页 |
| 1 前言 | 第14页 |
| 2 实验材料 | 第14-16页 |
| 2.1 实验动物 | 第14-15页 |
| 2.2 主要试剂 | 第15-16页 |
| 2.3 主要工作液 | 第16页 |
| 2.4 主要仪器 | 第16页 |
| 3 实验方法 | 第16-21页 |
| 3.1 树鼩原代肝细胞的分离及纯化方法的优化 | 第16-18页 |
| 3.2 树鼩原代肝细胞的培养及条件优化 | 第18-20页 |
| 3.2.1 树鼩原代肝细胞的培养 | 第18页 |
| 3.2.2 优化培养中饲养层细胞的制备 | 第18-20页 |
| 3.2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养 | 第18-19页 |
| 3.2.2.2 小鼠胚胎成纤维细胞的Giemsa染色 | 第19页 |
| 3.2.2.3 丝裂霉素处理小鼠胚胎成纤维细胞 | 第19-20页 |
| 3.2.3 树鼩原代肝细胞的优化培养 | 第20页 |
| 3.2.3.1 MTT法检测优化前后肝细胞的活力 | 第20页 |
| 3.3 树鼩原代肝细胞的鉴定 | 第20-21页 |
| 3.3.1 糖原染色 | 第20-21页 |
| 3.3.2 细胞免疫化学染色 | 第21页 |
| 3.4 统计方法 | 第21页 |
| 4 实验结果 | 第21-28页 |
| 4.1 两种方式纯化肝细胞的结果 | 第21-23页 |
| 4.1.1 两种纯化方式获取肝细胞量、成活率比较 | 第21-22页 |
| 4.1.2 两种纯化方式的细胞的形态 | 第22-23页 |
| 4.2 树鼩原代肝细胞形态变化 | 第23-24页 |
| 4.3 小鼠胚胎成纤维细胞形态变化 | 第24-25页 |
| 4.4 树鼩肝细胞优化培养前后的形态比较 | 第25-26页 |
| 4.5 优化培养前后肝细胞的活力检测结果 | 第26-27页 |
| 4.6 树鼩肝细胞的PAS染色 | 第27页 |
| 4.7 免疫细胞化学鉴定 | 第27页 |
| 4.8 原代树鼩肝细胞纯度 | 第27-28页 |
| 5 讨论 | 第28-30页 |
| 第二章 携带TLR3基因慢病毒载体的构建及其慢病毒包装的实验研究 | 第30-56页 |
| 1 前言 | 第30页 |
| 2 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.1 主要试剂 | 第30-31页 |
| 2.2 主要仪器 | 第31-33页 |
| 3 实验方法 | 第33-42页 |
| 3.1 获取和扩增hTLR3基因 | 第33-34页 |
| 3.1.1 hTLR3基因扩增 | 第33-34页 |
| 3.1.2 电泳检测与扩增产物回收纯化 | 第34页 |
| 3.2 重组质粒的构建 | 第34-38页 |
| 3.2.1 酶切与连接 | 第34-35页 |
| 3.2.2 重组质粒的转化、筛选和测序 | 第35页 |
| 3.2.3 去内毒素质粒提取 | 第35-37页 |
| 3.2.4 重组质粒转染 293T细胞 | 第37页 |
| 3.2.5 MTT法检测hTLR3基因对细胞增殖的影响 | 第37-38页 |
| 3.3 慢病毒的包装 | 第38-42页 |
| 3.3.1 脂质体剂量的条件优化 | 第38页 |
| 3.3.2 质粒比例正交试验设计 | 第38页 |
| 3.3.3 包装细胞 293T细胞的培养 | 第38-39页 |
| 3.3.4 细胞计数及存活率测定 | 第39页 |
| 3.3.5 细胞的复苏 | 第39页 |
| 3.3.6 细胞的传代 | 第39-40页 |
| 3.3.7 细胞的冻存 | 第40页 |
| 3.3.8 细胞转染 | 第40-41页 |
| 3.3.9 慢病毒的收集与浓缩 | 第41页 |
| 3.3.10 慢病毒的滴度测定 | 第41-42页 |
| 3.4 统计方法 | 第42页 |
| 4 实验结果 | 第42-53页 |
| 4.1 hTLR3基因PCR扩增结果 | 第42-43页 |
| 4.2 重组质粒的鉴定 | 第43-47页 |
| 4.2.1 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第43-44页 |
| 4.2.2 重组质粒的测序鉴定 | 第44-46页 |
| 4.2.3 重组质粒转染 293T细胞结果 | 第46页 |
| 4.2.4 hTLR3基因对细胞增殖的影响 | 第46-47页 |
| 4.3 慢病毒包装结果 | 第47-53页 |
| 4.3.1 脂质体剂量摸索的实验结果 | 第47-49页 |
| 4.3.2 质粒比例正交试验结果 | 第49-51页 |
| 4.3.2.1 正交试验直观分析 | 第50页 |
| 4.3.2.2 正交试验的方差分析 | 第50-51页 |
| 4.3.3 混合质粒共转染 293T细胞 | 第51-52页 |
| 4.3.4 慢病毒滴度检测结果 | 第52-53页 |
| 5 讨论 | 第53-56页 |
| 第三章 hTLR3转基因树鼩肝细胞模型的制备及鉴定 | 第56-65页 |
| 1 前言 | 第56页 |
| 2 实验材料 | 第56-57页 |
| 2.1 主要试剂 | 第56-57页 |
| 2.2 主要仪器 | 第57页 |
| 3 实验方法 | 第57-61页 |
| 3.1 慢病毒感染树鼩原代肝细胞 | 第57-58页 |
| 3.2 细胞中总RNA的提取 | 第58-59页 |
| 3.3 RT-PCR | 第59-60页 |
| 3.4 电泳检测与测序 | 第60-61页 |
| 4 实验结果 | 第61-63页 |
| 4.1 慢病毒感染树鼩原代肝细胞 | 第61-63页 |
| 4.1.1 荧光显微镜观察结果 | 第61页 |
| 4.1.2 分子鉴定结果 | 第61-62页 |
| 4.1.3 测序结果 | 第62-63页 |
| 5 讨论 | 第63-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 结语 | 第71-72页 |
| 英文缩略词表 | 第72-73页 |
| 综述 Toll样受体3与乙型肝炎病毒感染的研究现状 | 第73-83页 |
| 参考文献 | 第79-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
| 个人简历及攻读学位期间获得的科研成果 | 第85页 |
