中文摘要 | 第9-10页 |
Abstract | 第10-11页 |
第一章 前言 | 第12-22页 |
1.1 HIV-P24抗原 | 第12页 |
1.2 磁珠及其应用 | 第12-14页 |
1.2.1 磁珠简介 | 第12-13页 |
1.2.2 磁珠的应用 | 第13-14页 |
1.2.2.1 磁珠技术用于细胞分离方面 | 第13页 |
1.2.2.2 磁珠用于微生物检测方面 | 第13-14页 |
1.2.2.3 磁珠用于靶向药物治疗方面 | 第14页 |
1.2.2.4 磁珠用于免疫检测方面 | 第14页 |
1.3 SELEX技术及核酸适配体 | 第14-20页 |
1.3.1 SELEX技术 | 第14-17页 |
1.3.1.1 SELEX技术概述 | 第14-15页 |
1.3.1.2 SELEX技术的衍生 | 第15-17页 |
1.3.2 核酸适配体 | 第17-20页 |
1.3.2.1 核酸适配体的概述 | 第17-18页 |
1.3.2.2 核酸适配体的应用 | 第18-20页 |
1.4 课题研究目的及意义 | 第20-22页 |
第二章 HIV-P24抗原核酸适配体的筛选 | 第22-33页 |
2.1 前言 | 第22页 |
2.2 实验材料及仪器 | 第22-24页 |
2.2.1 实验材料及主要试剂 | 第22页 |
2.2.2 实验溶液配制 | 第22-23页 |
2.2.3 主要实验仪器 | 第23-24页 |
2.3 实验方法 | 第24-28页 |
2.3.1 目标靶蛋白分子P24抗原活性检测 | 第24-25页 |
2.3.2 HIV-P24抗原寡核甘酸适配体的筛选 | 第25-26页 |
2.3.2.1 第一轮筛选过程 | 第25页 |
2.3.2.2 第二轮筛选 | 第25-26页 |
2.3.2.3 第三轮筛选 | 第26页 |
2.3.2.4 后面四轮筛选 | 第26页 |
2.3.2.5 检测次级库富集情况 | 第26页 |
2.3.3 链霉亲和素磁珠分离法制备次级文库(ssDNA) | 第26-28页 |
2.4 结果及分析 | 第28-31页 |
2.4.1 靶蛋白HIV-P24抗原活性鉴定结果 | 第28页 |
2.4.2 HIV-P24抗原核酸适配体筛选结果 | 第28-30页 |
2.4.3 链霉亲和素磁珠的鉴定结果 | 第30-31页 |
2.4.4 dsDNA的制备结果 | 第31页 |
2.5 讨论 | 第31-33页 |
第三章 HIV-P24抗原核酸适配体的克隆、鉴定及测序 | 第33-46页 |
3.1 前言 | 第33页 |
3.2 实验材料与仪器 | 第33-35页 |
3.2.1 实验材料与试剂 | 第33页 |
3.2.2 主要溶液配制 | 第33-35页 |
3.2.3 实验主要仪器 | 第35页 |
3.3 实验方法 | 第35-38页 |
3.3.1 次级寡核甘酸库的转化及克隆 | 第35-37页 |
3.3.1.1 感受态细胞的制备 | 第35-36页 |
3.3.1.2 次级文库dsDNA的制备 | 第36-37页 |
3.3.1.3 制备好的dsDNA与pMD18-T质粒载体连接 | 第37页 |
3.3.1.4 重组质粒载体转化大肠杆菌DH5α | 第37页 |
3.3.2 利用交错PCR技术鉴定阳性克隆 | 第37-38页 |
3.3.3 阳性克隆与HIV-P24抗原特异性结合情况验证 | 第38页 |
3.3.4 测序 | 第38页 |
3.4 实验结果及分析 | 第38-45页 |
3.4.1 制备次级文库dsDNA的电泳结果 | 第38-39页 |
3.4.2 重组质粒转化大肠杆菌的结果 | 第39页 |
3.4.3 交错PCR鉴定阳性克隆的结果 | 第39-40页 |
3.4.4 阳性克隆与HIV-p24抗原的特异性验证结果 | 第40-43页 |
3.4.5 菌液测序结果 | 第43-45页 |
3.5 讨论 | 第45-46页 |
第四章 小结 | 第46-47页 |
参考文献 | 第47-53页 |
附录 | 第53-55页 |
硕士期间发表文章 | 第55-56页 |
致谢 | 第56页 |