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重寄生真菌盾壳霉感应环境pH值的分子机制及其对生防效果影响的研究

摘要第9-12页
ABSTRACT第12-14页
缩略词表(ABBREVIATION)第15-17页
第一章 文献综述第17-32页
    1.核盘菌的研究进展第17-22页
        1.1.核盘菌及其危害第17页
        1.2 核盘菌的形态及生物学特性第17-18页
        1.3 核盘菌的致病机理第18-20页
            1.3.1 侵染结构第18-19页
            1.3.2 草酸第19页
            1.3.3 细胞壁降解酶第19-20页
        1.4 油菜菌核病的防治第20-22页
    2 盾壳霉研究进展第22-23页
        2.1 盾壳霉生物学特性第22-23页
        2.2 盾壳霉生态学特性第23页
    3 盾壳霉防治核盘菌的机制第23-25页
        3.1 重寄生作用第23-24页
        3.2 抗生作用第24页
        3.3 降解草酸毒素第24-25页
    4 环境PH对盾壳霉生防机制的调控第25-26页
        4.1 环境pH对盾壳霉重寄生作用的调控第25页
        4.2 环境pH对盾壳霉降解草酸以及抗生作用的调控第25-26页
    5 真菌适应环境PH值的研究进展第26-30页
        5.1 受环境pH值调控的基因第26-27页
        5.2 真菌pH调控的分子机理第27-30页
    6 本课题的研究意义与内容第30-32页
        6.1 研究意义第30-31页
        6.2 研究内容第31-32页
第二章 核心转录因子Cmpac C参与调控盾壳霉的菌丝生长发育第32-56页
    1 材料和方法第32-43页
        1.1 供试材料第32-33页
        1.2 溶液和培养基配方第33-36页
        1.3 仪器与设备第36页
        1.4 试验方法第36-43页
            1.4.1 不同pH值条件下菌丝培养第36页
            1.4.2 菌丝生长以及产孢量试验第36-38页
            1.4.3 核酸提取第38-39页
            1.4.4 c DNA的合成第39页
            1.4.5 实时定量PCR(q RT-PCR)分析第39-40页
            1.4.6 Sourthern杂交第40-41页
            1.4.7 转录激活试验第41-42页
            1.4.8 原生质体PEG介导Cmpac C基因的敲除第42-43页
    2 结果与分析第43-53页
        2.1 Cmpac C蛋白的转录功能分析第43-44页
        2.2 核心转录因子Cmpac C的功能研究第44-53页
            2.2.1 Cmpac C的敲除与互补转化子的筛选与鉴定第44-46页
            2.2.2 Cmpac C敲除突变体的生物学表型分析第46-53页
    3 结论与讨论第53-56页
        3.1 结论第53-54页
        3.2 讨论第54-56页
第三章 Cmpac C对盾壳霉重寄生、草酸毒素降解以及抗真菌作用的调控第56-83页
    1 材料和方法第56-66页
        1.1 供试菌株第56页
        1.2 主要仪器设备第56页
        1.3 试验试剂第56-58页
        1.4 试验方法第58-66页
            1.4.1 盾壳霉寄生核盘菌能力检测的试验第58-59页
            1.4.2 盾壳霉降解草酸盐的定量检测第59-60页
            1.4.3 盾壳霉菌株产抗真菌物质(AFS)能力的检测第60-61页
            1.4.4 盾壳霉重寄生相关基因的表达量检测以及酶活分析第61-64页
            1.4.5 蛋白纯化和表达第64-65页
            1.4.6 凝胶阻滞试验(EMSA)第65-66页
    2 结果与分析第66-78页
        2.1 Cmpac C对盾壳霉寄生核盘菌的影响第66-68页
            2.1.1 Cmpac C对寄生核盘菌菌丝的影响第66-67页
            2.1.2 Cmpac C对盾壳霉寄生核盘菌菌核的影响第67-68页
        2.2 Cmpac C对盾壳霉寄生相关胞外酶基因表达以及酶活性的调控第68-71页
            2.2.1 Cmpac C对重寄生相关基因表达以及酶活性的影响第68-70页
            2.2.2 EMSA验证Cmpac C与Cmch1和Cmg1启动子的结合活性第70-71页
        2.3 Cmpac C对盾壳霉降解草酸盐能力的影响第71-75页
            2.3.1 Cmpac C对盾壳霉在弱酸性pH下降解草酸根离子的影响第71-73页
            2.3.2 Cmpac C敲除对Cmoxdc1表达量和总草酸脱羧酶活性的影响第73-75页
        2.4 Cmpac C敲除对盾壳霉产生AFS(抗真菌物质)的影响第75-77页
        2.5 Cmpac C敲除后抗真菌物质合成仍然受氮源调控第77-78页
    3 小结与讨论第78-83页
        3.1 小结第78-79页
        3.2 讨论第79-83页
第四章 Pal信号途径对盾壳霉菌丝生长发育的影响第83-96页
    1 材料和方法第83-86页
        1.1 供试材料第83页
        1.2 溶液和培养基配方第83-85页
        1.3 试验方法第85-86页
            1.3.1 系统进化树分析第85页
            1.3.2 敲除载体的构建第85页
            1.3.3 原生质体制备与转化第85页
            1.3.4 不同pH下菌丝生长速度的测定第85-86页
            1.3.5 产孢量的测定第86页
            1.3.6 对高渗高盐压力的敏感性第86页
    2 结果与分析第86-94页
        2.1 系统进化树分析第86-88页
        2.2 Pal-pH信号途径上游相关基因的敲除第88-90页
        2.3 敲除突变体在不同pH下条件下的菌丝生长第90-92页
        2.4 敲除突变体对高渗高盐压力的敏感性第92-93页
        2.5 敲除突变体与野生型菌株的产孢量比较第93-94页
    3 小结与讨论第94-96页
第五章 Pal信号途径对盾壳霉重寄生和抗生作用的影响第96-109页
    1 材料和方法第96-97页
        1.1 供试菌株第96页
        1.2 主要仪器设备第96页
        1.3 试验方法第96-97页
            1.3.1 突变体寄生核盘菌菌丝能力检测第96-97页
            1.3.2 抗真菌作用的测定第97页
    2 结果与分析第97-106页
        2.1 敲除Pal信号通路基因对盾壳霉寄生核盘菌菌丝的影响第97-99页
        2.2 敲除Pal基因对盾壳霉寄生核盘菌菌核的影响第99-100页
        2.3 Pal基因对盾壳霉重寄生相关酶基因表达量的影响第100-104页
        2.4 敲除Pal基因对盾壳霉AFS产量的影响第104-106页
    3 小结与讨论第106-109页
        3.1 小结第106-107页
        3.2 讨论第107-109页
第六章 结论与展望第109-113页
    1 主要结论第109-112页
    2 展望第112页
    3 论文主要创新点第112-113页
参考文献第113-133页
附录1 本研究中所使用的引物序列第133-137页
附录2 本研究中所使用的培养基以及缓冲液的配方第137-138页
附录3 多因素方差分析I第138-139页
附录4 多因素方差分析II第139页
附录5 Cmoxdc1, Cmch1和Cmg1启动子序列中潜在的转录因子的统计第139-143页
附录6 本论文研究所用到的载体第143-145页
附录7 载体的构建以及相关试验结果的附图第145-155页
附录8 在读期间发表论文第155-156页
致谢第156-157页

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