摘要 | 第9-12页 |
ABSTRACT | 第12-14页 |
缩略词表(ABBREVIATION) | 第15-17页 |
第一章 文献综述 | 第17-32页 |
1.核盘菌的研究进展 | 第17-22页 |
1.1.核盘菌及其危害 | 第17页 |
1.2 核盘菌的形态及生物学特性 | 第17-18页 |
1.3 核盘菌的致病机理 | 第18-20页 |
1.3.1 侵染结构 | 第18-19页 |
1.3.2 草酸 | 第19页 |
1.3.3 细胞壁降解酶 | 第19-20页 |
1.4 油菜菌核病的防治 | 第20-22页 |
2 盾壳霉研究进展 | 第22-23页 |
2.1 盾壳霉生物学特性 | 第22-23页 |
2.2 盾壳霉生态学特性 | 第23页 |
3 盾壳霉防治核盘菌的机制 | 第23-25页 |
3.1 重寄生作用 | 第23-24页 |
3.2 抗生作用 | 第24页 |
3.3 降解草酸毒素 | 第24-25页 |
4 环境PH对盾壳霉生防机制的调控 | 第25-26页 |
4.1 环境pH对盾壳霉重寄生作用的调控 | 第25页 |
4.2 环境pH对盾壳霉降解草酸以及抗生作用的调控 | 第25-26页 |
5 真菌适应环境PH值的研究进展 | 第26-30页 |
5.1 受环境pH值调控的基因 | 第26-27页 |
5.2 真菌pH调控的分子机理 | 第27-30页 |
6 本课题的研究意义与内容 | 第30-32页 |
6.1 研究意义 | 第30-31页 |
6.2 研究内容 | 第31-32页 |
第二章 核心转录因子Cmpac C参与调控盾壳霉的菌丝生长发育 | 第32-56页 |
1 材料和方法 | 第32-43页 |
1.1 供试材料 | 第32-33页 |
1.2 溶液和培养基配方 | 第33-36页 |
1.3 仪器与设备 | 第36页 |
1.4 试验方法 | 第36-43页 |
1.4.1 不同pH值条件下菌丝培养 | 第36页 |
1.4.2 菌丝生长以及产孢量试验 | 第36-38页 |
1.4.3 核酸提取 | 第38-39页 |
1.4.4 c DNA的合成 | 第39页 |
1.4.5 实时定量PCR(q RT-PCR)分析 | 第39-40页 |
1.4.6 Sourthern杂交 | 第40-41页 |
1.4.7 转录激活试验 | 第41-42页 |
1.4.8 原生质体PEG介导Cmpac C基因的敲除 | 第42-43页 |
2 结果与分析 | 第43-53页 |
2.1 Cmpac C蛋白的转录功能分析 | 第43-44页 |
2.2 核心转录因子Cmpac C的功能研究 | 第44-53页 |
2.2.1 Cmpac C的敲除与互补转化子的筛选与鉴定 | 第44-46页 |
2.2.2 Cmpac C敲除突变体的生物学表型分析 | 第46-53页 |
3 结论与讨论 | 第53-56页 |
3.1 结论 | 第53-54页 |
3.2 讨论 | 第54-56页 |
第三章 Cmpac C对盾壳霉重寄生、草酸毒素降解以及抗真菌作用的调控 | 第56-83页 |
1 材料和方法 | 第56-66页 |
1.1 供试菌株 | 第56页 |
1.2 主要仪器设备 | 第56页 |
1.3 试验试剂 | 第56-58页 |
1.4 试验方法 | 第58-66页 |
1.4.1 盾壳霉寄生核盘菌能力检测的试验 | 第58-59页 |
1.4.2 盾壳霉降解草酸盐的定量检测 | 第59-60页 |
1.4.3 盾壳霉菌株产抗真菌物质(AFS)能力的检测 | 第60-61页 |
1.4.4 盾壳霉重寄生相关基因的表达量检测以及酶活分析 | 第61-64页 |
1.4.5 蛋白纯化和表达 | 第64-65页 |
1.4.6 凝胶阻滞试验(EMSA) | 第65-66页 |
2 结果与分析 | 第66-78页 |
2.1 Cmpac C对盾壳霉寄生核盘菌的影响 | 第66-68页 |
2.1.1 Cmpac C对寄生核盘菌菌丝的影响 | 第66-67页 |
2.1.2 Cmpac C对盾壳霉寄生核盘菌菌核的影响 | 第67-68页 |
2.2 Cmpac C对盾壳霉寄生相关胞外酶基因表达以及酶活性的调控 | 第68-71页 |
2.2.1 Cmpac C对重寄生相关基因表达以及酶活性的影响 | 第68-70页 |
2.2.2 EMSA验证Cmpac C与Cmch1和Cmg1启动子的结合活性 | 第70-71页 |
2.3 Cmpac C对盾壳霉降解草酸盐能力的影响 | 第71-75页 |
2.3.1 Cmpac C对盾壳霉在弱酸性pH下降解草酸根离子的影响 | 第71-73页 |
2.3.2 Cmpac C敲除对Cmoxdc1表达量和总草酸脱羧酶活性的影响 | 第73-75页 |
2.4 Cmpac C敲除对盾壳霉产生AFS(抗真菌物质)的影响 | 第75-77页 |
2.5 Cmpac C敲除后抗真菌物质合成仍然受氮源调控 | 第77-78页 |
3 小结与讨论 | 第78-83页 |
3.1 小结 | 第78-79页 |
3.2 讨论 | 第79-83页 |
第四章 Pal信号途径对盾壳霉菌丝生长发育的影响 | 第83-96页 |
1 材料和方法 | 第83-86页 |
1.1 供试材料 | 第83页 |
1.2 溶液和培养基配方 | 第83-85页 |
1.3 试验方法 | 第85-86页 |
1.3.1 系统进化树分析 | 第85页 |
1.3.2 敲除载体的构建 | 第85页 |
1.3.3 原生质体制备与转化 | 第85页 |
1.3.4 不同pH下菌丝生长速度的测定 | 第85-86页 |
1.3.5 产孢量的测定 | 第86页 |
1.3.6 对高渗高盐压力的敏感性 | 第86页 |
2 结果与分析 | 第86-94页 |
2.1 系统进化树分析 | 第86-88页 |
2.2 Pal-pH信号途径上游相关基因的敲除 | 第88-90页 |
2.3 敲除突变体在不同pH下条件下的菌丝生长 | 第90-92页 |
2.4 敲除突变体对高渗高盐压力的敏感性 | 第92-93页 |
2.5 敲除突变体与野生型菌株的产孢量比较 | 第93-94页 |
3 小结与讨论 | 第94-96页 |
第五章 Pal信号途径对盾壳霉重寄生和抗生作用的影响 | 第96-109页 |
1 材料和方法 | 第96-97页 |
1.1 供试菌株 | 第96页 |
1.2 主要仪器设备 | 第96页 |
1.3 试验方法 | 第96-97页 |
1.3.1 突变体寄生核盘菌菌丝能力检测 | 第96-97页 |
1.3.2 抗真菌作用的测定 | 第97页 |
2 结果与分析 | 第97-106页 |
2.1 敲除Pal信号通路基因对盾壳霉寄生核盘菌菌丝的影响 | 第97-99页 |
2.2 敲除Pal基因对盾壳霉寄生核盘菌菌核的影响 | 第99-100页 |
2.3 Pal基因对盾壳霉重寄生相关酶基因表达量的影响 | 第100-104页 |
2.4 敲除Pal基因对盾壳霉AFS产量的影响 | 第104-106页 |
3 小结与讨论 | 第106-109页 |
3.1 小结 | 第106-107页 |
3.2 讨论 | 第107-109页 |
第六章 结论与展望 | 第109-113页 |
1 主要结论 | 第109-112页 |
2 展望 | 第112页 |
3 论文主要创新点 | 第112-113页 |
参考文献 | 第113-133页 |
附录1 本研究中所使用的引物序列 | 第133-137页 |
附录2 本研究中所使用的培养基以及缓冲液的配方 | 第137-138页 |
附录3 多因素方差分析I | 第138-139页 |
附录4 多因素方差分析II | 第139页 |
附录5 Cmoxdc1, Cmch1和Cmg1启动子序列中潜在的转录因子的统计 | 第139-143页 |
附录6 本论文研究所用到的载体 | 第143-145页 |
附录7 载体的构建以及相关试验结果的附图 | 第145-155页 |
附录8 在读期间发表论文 | 第155-156页 |
致谢 | 第156-157页 |