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微囊藻毒素-LR酶联免疫法的开发研究

中文摘要第1-5页
英文摘要第5-10页
1 前言第10-23页
   ·问题的提出第10-11页
   ·现状及国内研究背景第11-19页
     ·微囊藻毒素及污染现状第11-13页
     ·研究背景第13-19页
       ·微囊藻毒素提取的研究现状第13-16页
         ·破损蓝藻细胞的方法第13-14页
         ·溶剂萃取的主要体系第14页
         ·固相萃取(SPE)第14-15页
         ·固相微萃取(SPME)第15页
         ·分离技术第15-16页
       ·国内外微囊藻毒素分析方法进展第16-17页
       ·酶联免疫检测在微囊藻毒素检测方法中的应用进展第17-19页
         ·ELISA 及检测过程中的关键问题第17-18页
         ·ELISA 的改进和发展第18-19页
   ·研究意义第19-20页
     ·各级环境监测站都有检测需要第19-20页
     ·目前应用的HPLC 法――高价设备、前处理要求高、标准试剂品费用高第20页
     ·ELISA 法简单易行,可作为是否实施HPLC 的前期试验第20页
   ·研究难点第20-22页
   ·技术路线第22-23页
2 材料与方法第23-35页
   ·材料第23-25页
     ·实验仪器设备及耗材第23页
     ·SDS-PAGE 电泳缓冲液准备第23-24页
     ·ELISA 主要试剂配制第24页
     ·细胞培养试剂系统第24-25页
     ·实验动物及细胞第25页
   ·方法第25-35页
     ·MC-LR 的提取与纯化第25-26页
       ·蓝藻样品的收集与预处理第25页
       ·初步分离 MC-LR 色谱条件第25页
       ·MC-LR 的纯化第25-26页
       ·MC-LR 的鉴定及纯度测定第26页
     ·完全抗原的合成第26-29页
       ·合成原理第26-27页
         ·MC-LR 完全抗原的人工合成第26-27页
         ·产物的纯化及鉴定第27页
       ·试验操作的具体过程第27-29页
         ·微囊藻毒素的氨基活化第27页
         ·戊二醛两步法合成微囊藻毒素完全抗原第27-29页
     ·微囊藻毒素-LR 单克隆抗体细胞株系的研究第29-35页
       ·实验原理第29页
       ·动物免疫第29-30页
       ·细胞融合第30-32页
         ·骨髓瘤细胞的复苏与培养第30-31页
         ·饲养细胞的制备第31页
         ·细胞融合方法及具体步骤第31-32页
       ·观察细胞生长情况第32页
       ·杂交瘤细胞的筛选第32-33页
         ·阳性细胞孔的筛选第32页
         ·阳性细胞孔的进一步筛选第32-33页
         ·阳性杂交瘤细胞的克隆和扩大培养第33页
         ·细胞的冻存第33页
       ·ELISA 检测方法的建立第33-35页
         ·包被抗原最适浓度的确定第33-34页
         ·血清效价的测定第34-35页
3 实验结果与分析第35-49页
   ·MC-LR 提取与分离实验结果第35-40页
     ·初步分离MC-LR 色谱条件第35-36页
     ·MC-LR 的鉴定结果第36-39页
       ·MC-LR 定性鉴定结果第36-38页
       ·MC-LR 纯度鉴定结果第38-39页
       ·MC-LR 提取总量第39页
     ·小结第39-40页
   ·MC-LR 人工抗原的鉴定及结果第40-44页
     ·H2N-etMC-LR 的鉴定及结果第40页
     ·微囊藻毒素完全抗原的定性鉴定第40-41页
     ·微囊藻毒素完全抗原的定量鉴定第41页
     ·微囊藻毒素完全抗原研制的讨论第41-44页
       ·MC-LR 的氨基衍生化第41-42页
       ·戊二醛两步法合成微囊藻毒素人工抗原第42页
       ·完全抗原的鉴定第42-44页
   ·微囊藻毒素-LR 单克隆抗体细胞株系建立的结果第44-49页
     ·包被抗原最适浓度的确定第44-45页
     ·血清抗体效价的测定第45页
     ·杂交瘤细胞株的建立第45-47页
       ·阳性细胞孔的筛选第45-47页
       ·阳性孔细胞的克隆和细胞保存第47页
     ·小结与讨论第47-49页
       ·包被抗原最适浓度的确定第47页
       ·血清抗体效价的测定第47-48页
       ·杂交瘤细胞株的建立第48-49页
4 结论第49-51页
5 总结与展望第51-53页
参考文献第53-59页
致谢第59页

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