| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 常用缩写词英汉对照表 | 第11-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-24页 |
| 1 奶牛早期妊娠诊断的意义 | 第12-13页 |
| 2 奶牛早期妊娠诊断技术的研究进展 | 第13-18页 |
| 2.1 直肠检查法 | 第13-14页 |
| 2.2 超声波检查法 | 第14页 |
| 2.3 牛妊娠相关物质诊断法 | 第14-15页 |
| 2.3.1 妊娠相关糖蛋白（PAG）诊断法 | 第14页 |
| 2.3.2 妊娠特异性蛋白B（PSP-B）诊断法 | 第14-15页 |
| 2.3.3 血清酸滴定法 | 第15页 |
| 2.4 早孕因子诊断法 | 第15-18页 |
| 2.4.1 硫酸铜法 | 第15-16页 |
| 2.4.2 玫瑰花环抑制试验 | 第16页 |
| 2.4.3 酶联免疫测定法 | 第16-17页 |
| 2.4.4 胶体金试纸条检测法 | 第17-18页 |
| 3 早孕因子的研究进展 | 第18-24页 |
| 3.1 早孕因子的化学本质 | 第18-19页 |
| 3.2 早孕因子的结构 | 第19-20页 |
| 3.3 早孕因子的来源 | 第20页 |
| 3.4 早孕因子的生物学作用 | 第20-21页 |
| 3.5 早孕因子的纯化 | 第21-22页 |
| 3.6 早孕因子的临床应用 | 第22-24页 |
| 3.6.1 诊断肿瘤 | 第22页 |
| 3.6.2 预测流产 | 第22-23页 |
| 3.6.3 超早孕检测 | 第23-24页 |
| 第二章 试验研究 | 第24-56页 |
| 试验一 qRT-PCR检测奶牛不同生殖部位EPF基因的表达量 | 第24-32页 |
| 1 材料与方法 | 第24-27页 |
| 1.1 样品来源 | 第24页 |
| 1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 1.3 主要仪器 | 第24-25页 |
| 1.4 方法原理 | 第25页 |
| 1.5 引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 1.6 Trizol法提取组织总RNA | 第26-27页 |
| 1.7 组织RNA的反转录 | 第27页 |
| 1.8 电泳检测目的基因、内参基因的PCR反应条件 | 第27页 |
| 1.9 实时荧光定量PCR反应条件 | 第27页 |
| 1.10 重复性试验 | 第27页 |
| 2 结果 | 第27-30页 |
| 2.1 EPF基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2 重复性试验 | 第28-29页 |
| 2.3 qRT-PCR检测牛EPF基因的表达水平 | 第29-30页 |
| 3 讨论与分析 | 第30-32页 |
| 试验二 基于EPF检测的奶牛早孕诊断双抗体夹心ELISA方法的初步建立 | 第32-44页 |
| 1 材料与方法 | 第32-35页 |
| 1.1 样品来源 | 第32页 |
| 1.2 主要试剂 | 第32-33页 |
| 1.3 主要试剂的配置 | 第33页 |
| 1.4 方法原理 | 第33-34页 |
| 1.4.1 双抗体夹心ELISA原理 | 第33页 |
| 1.4.2 双抗体夹心ELISA方法的步骤 | 第33-34页 |
| 1.5 小鼠抗牛EPF腹水单抗的初步筛选 | 第34页 |
| 1.6 小鼠腹水单抗效价的测定 | 第34页 |
| 1.7 酶标抗牛EPF单克隆抗体的效价检测 | 第34-35页 |
| 1.8 确定6株抗牛EPF单抗是否针对不同的抗原表位 | 第35页 |
| 1.9 确定包被抗体与酶标抗体的最佳工作浓度 | 第35页 |
| 1.10 孕牛血清检测单抗效果 | 第35页 |
| 2 结果 | 第35-41页 |
| 2.1 初步筛选小鼠腹水标准曲线的建立 | 第35-36页 |
| 2.2 小鼠腹水效价的测定 | 第36-37页 |
| 2.3 酶标抗体的效价检测结果 | 第37-38页 |
| 2.4 双抗体夹心ELISA检测十种配对组合 | 第38-39页 |
| 2.5 确定包被抗体与酶标抗体的最佳工作浓度 | 第39-40页 |
| 2.6 双抗体夹心ELISA检测孕牛血清 | 第40-41页 |
| 3 讨论与分析 | 第41-44页 |
| 试验三 基于EPF检测的奶牛早孕诊断胶体金免疫层析试纸条方法的建立 | 第44-56页 |
| 1 材料与方法 | 第44-49页 |
| 1.1 样品来源 | 第44页 |
| 1.2 主要试剂 | 第44-45页 |
| 1.3 主要仪器 | 第45页 |
| 1.4 主要试剂的配置 | 第45-46页 |
| 1.5 胶体金免疫层析试纸条的制备 | 第46-47页 |
| 1.5.1 玻璃器皿的清洁 | 第46页 |
| 1.5.2 柠檬酸三钠还原法制备胶体金溶液 | 第46页 |
| 1.5.3 胶体金溶液的质量鉴定 | 第46页 |
| 1.5.4 抗牛EPF单克隆抗体的标记条件 | 第46-47页 |
| 1.5.5 免疫胶体金复合物的制备 | 第47页 |
| 1.5.6 金标抗牛EPF单克隆抗体复合物的鉴定 | 第47页 |
| 1.6 斑点金渗滤实验 | 第47-48页 |
| 1.6.1 渗滤卡的组装及单抗点膜 | 第47-48页 |
| 1.6.2 检测人工重组牛EPF蛋白 | 第48页 |
| 1.7 试纸条的组装及检测 | 第48-49页 |
| 1.7.1 上样垫的预处理 | 第48页 |
| 1.7.2 结合垫的预处理 | 第48页 |
| 1.7.3 NC膜的预处理 | 第48页 |
| 1.7.4 NC膜上金标抗牛EPF单克隆抗体最适稀释度的确定 | 第48页 |
| 1.7.5 喷金法制备金标垫 | 第48页 |
| 1.7.6 免疫层析试纸条的组装 | 第48-49页 |
| 1.7.7 免疫层析胶体金试纸条检测系统的建立 | 第49页 |
| 1.7.8 阳性组织的试纸条检测 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-54页 |
| 2.1 最适柠檬酸三钠加入量 | 第49-50页 |
| 2.2 胶体金的表征 | 第50页 |
| 2.3 抗牛EPF单克隆抗体的最佳标记条件 | 第50页 |
| 2.4 金标抗体复合物的鉴定 | 第50-51页 |
| 2.5 金标垫的最佳优化条件及封闭剂的选择 | 第51-52页 |
| 2.6 上样垫的最佳优化条件及封闭剂的选择 | 第52页 |
| 2.7 卡盒检测人工重组牛EPF结果 | 第52页 |
| 2.8 胶体金试纸条的检测结果 | 第52-54页 |
| 2.8.1 四组配对单抗检测结果 | 第52-53页 |
| 2.8.2 检测试纸条灵敏度 | 第53页 |
| 2.8.3 检测试纸条特异性 | 第53-54页 |
| 2.8.4 检测试纸条稳定性 | 第54页 |
| 2.8.5 胶体金试纸条的临床检测 | 第54页 |
| 2.8.6 阴道黏液组织的试纸条检测结果 | 第54页 |
| 3 讨论与分析 | 第54-56页 |
| 全文总结 | 第56-57页 |
| 创新点 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 作者简介 | 第64-65页 |
| 附件 | 第65页 |
