| 内容提要 | 第4-5页 |
| 中文摘要 | 第5-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 第1章 文献回顾 | 第21-43页 |
| 第1节 Aβ蛋白概述 | 第21-32页 |
| 1.1 Aβ蛋白的来源和分类 | 第21-23页 |
| 1.2 Aβ蛋白的分子结构 | 第23-24页 |
| 1.3 Aβ蛋白与阿尔兹海默病 | 第24-31页 |
| 1.4 Aβ蛋白的制备 | 第31-32页 |
| 第2节 神经干细胞的研究进展 | 第32-43页 |
| 2.1 神经干细胞的概念 | 第32-33页 |
| 2.2 神经干细胞的来源与特性 | 第33-35页 |
| 2.3 体外培养神经干细胞的应用 | 第35-40页 |
| 2.4 转基因神经干细胞在脑及脊髓损伤中的作用 | 第40-41页 |
| 2.5 神经干细胞研究的前景及展望 | 第41-43页 |
| 第2章 rhAβ_(1-42)在毕赤酵母中的高效分泌表达及纯化工艺 | 第43-69页 |
| 2.1 材料与方法 | 第43-58页 |
| 2.1.1 器材及设备 | 第43-45页 |
| 2.1.2 主要试剂及配制 | 第45页 |
| 2.1.3 溶液配制 | 第45-47页 |
| 2.1.4 质粒与菌株 | 第47页 |
| 2.1.5 毕赤酵母的转化 | 第47-49页 |
| 2.1.6 阳性菌株的筛选 | 第49-50页 |
| 2.1.7 表达产物rhAβ_(1-42)分析 | 第50-52页 |
| 2.1.8 确定毕赤酵母表达rhAβ_(1-42)的最佳pH值 | 第52-53页 |
| 2.1.9 rhAβ_(1-42)的摇瓶水平发酵表达 | 第53页 |
| 2.1.10 rhAβ_(1-42)的小量纯化 | 第53-56页 |
| 2.1.11 rhAβ_(1-42)的分析鉴定 | 第56-58页 |
| 2.2 结果 | 第58-62页 |
| 2.2.1 PCR方法筛选rhAβ_(1-42)转化阳性菌株 | 第58-59页 |
| 2.2.2 Tricine-SDS-PAGE筛选rhAβ_(1-42)表达的高峰时间 | 第59页 |
| 2.2.3 SDS-PAGE筛选高表达rhAβ_(1-42)的工程菌 | 第59-60页 |
| 2.2.4 毕赤酵母表达rhAβ_(1-42)最佳pH值的确定 | 第60-62页 |
| 2.3 rhAβ_(1-42)的小量纯化 | 第62-64页 |
| 2.3.1 硫酸铵分级沉淀 | 第62页 |
| 2.3.2 透析 | 第62页 |
| 2.3.3 AKTA Explorer中压层析系统纯化 | 第62页 |
| 2.3.4 Tricine-SDS-PAGE和Western blotting分析纯化rhAβ_(1-42) | 第62-64页 |
| 2.4 讨论 | 第64-69页 |
| 第3章 rhAβ_(1-42)促进人神经干细胞凋亡作用的研究 | 第69-97页 |
| 3.1 材料和方法 | 第69-77页 |
| 3.1.1 器材及设备 | 第69-70页 |
| 3.1.2 主要试剂及配制 | 第70页 |
| 3.1.3 溶液配制 | 第70-71页 |
| 3.1.4 Aβ_(1-42)寡聚体的制备 | 第71页 |
| 3.1.5 神经干细胞和皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第71-72页 |
| 3.1.6 神经干细胞的鉴定 | 第72-73页 |
| 3.1.7 形态学特征观察 | 第73页 |
| 3.1.8 rhAβ_(1-42)对神经干细胞生长作用的检测 | 第73-75页 |
| 3.1.9 流式细胞术检测rhAβ_(1-42)对神经干细胞凋亡率的影响 | 第75页 |
| 3.1.10 rhAβ_(1-42)致人神经干细胞的神经发生效应 | 第75-76页 |
| 3.1.11 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第76页 |
| 3.1.12 超微结构分析 | 第76-77页 |
| 3.2 结果 | 第77-91页 |
| 3.2.1 神经干细胞和皮肤成纤维细胞的分离、培养和形态学观察 | 第77-79页 |
| 3.2.2 神经干细胞的鉴定 | 第79-80页 |
| 3.2.3 rhAβ_(1-42)对神经干细胞形态的影响 | 第80-81页 |
| 3.2.4 rhAβ_(1-42)对神经干细胞生长作用的检测 | 第81-86页 |
| 3.2.5 rhAβ_(1-42)对人皮肤成纤维细胞的作用 | 第86-87页 |
| 3.2.6 rhAβ_(1-42)对神经干细胞凋亡率的影响 | 第87-89页 |
| 3.2.7 DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第89页 |
| 3.2.8 透射电子显微镜下观察对神经干细胞超微结构的影响 | 第89-90页 |
| 3.2.9 神经发生效应 | 第90-91页 |
| 3.3 讨论 | 第91-97页 |
| 第4章 rhAβ_(1-42)促进人神经胶质瘤U251细胞凋亡作用的研究 | 第97-111页 |
| 4.1 材料与方法 | 第97-102页 |
| 4.1.1 器材及设备 | 第97-98页 |
| 4.1.2 主要试剂及配制 | 第98页 |
| 4.1.3 溶液配制 | 第98-99页 |
| 4.1.4 细胞培养 | 第99页 |
| 4.1.5 细胞体外增殖能力测定 | 第99-100页 |
| 4.1.6 细胞形态学观察 | 第100页 |
| 4.1.7 AO/EB观察细胞形态学改变 | 第100-101页 |
| 4.1.8 流式细胞术检测rhAβ_(1-42)对U251细胞的凋亡作用 | 第101页 |
| 4.1.9 Western blotting | 第101页 |
| 4.1.10 统计学方法 | 第101-102页 |
| 4.2 结果 | 第102-107页 |
| 4.2.1 rhAβ_(1-42)对U251细胞增殖能力的影响 | 第102-103页 |
| 4.2.2 倒置相差显微镜下观察细胞形态变化 | 第103页 |
| 4.2.3 AO/EB双染法观察细胞凋亡形态学改变 | 第103-105页 |
| 4.2.4 流式细胞术分析rhAβ_(1-42)对U251细胞的凋亡影响 | 第105-106页 |
| 4.2.5 Western blotting检测不同浓度rhAβ_(1-42)对U251细胞凋亡蛋白bax,bcl-2的表达情况 | 第106-107页 |
| 4.3 讨论 | 第107-111页 |
| 研究总结 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-125页 |
| 攻读博士期间所取得科研成果 | 第125-127页 |
| 致谢 | 第127页 |
