| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第12-62页 |
| 1.1 细胞有丝分裂简介 | 第12-30页 |
| 1.1.1 细胞有丝分裂周期 | 第12-15页 |
| 1.1.2 中心体 | 第15-17页 |
| 1.1.3 动点结构 | 第17-21页 |
| 1.1.4 纺锤体组装及微管动点连接 | 第21-26页 |
| 1.1.5 MCAK调控纺锤体微管动态性 | 第26-30页 |
| 1.2 LKB1的研究进展 | 第30-42页 |
| 1.2.1 Peutz-Jeghers综合症 | 第30-32页 |
| 1.2.2 LKB1是抑癌基因 | 第32页 |
| 1.2.3 STRAD-LKB1-MO25蛋白复合物 | 第32-35页 |
| 1.2.4 LKB1参与调控的细胞生命活动 | 第35-42页 |
| 1.3 AMPK的研究进展 | 第42-61页 |
| 1.3.1 AMPK的结构 | 第42-45页 |
| 1.3.2 AMPK的活化 | 第45-47页 |
| 1.3.3 AMPK的小分子激活剂和抑制剂 | 第47页 |
| 1.3.4 AMPK参与调控的细胞生命活动 | 第47-56页 |
| 1.3.5 AMPK与癌症 | 第56-61页 |
| 1.4 展望 | 第61-62页 |
| 第2章 STRADα-LKB1-MCAK通路调控有丝分裂进程 | 第62-106页 |
| 2.1 引言 | 第62-65页 |
| 2.2 实验结果与分析 | 第65-104页 |
| 2.2.1 STRADα-LKB1在动点上定位 | 第65-70页 |
| 2.2.2 STRADα能招募LKB1到中心体和动点上 | 第70-74页 |
| 2.2.3 STRADα-LKB1复合物调控细胞有丝分裂进程 | 第74-78页 |
| 2.2.4 动点上稳定表达LKB1影响有丝分裂进程 | 第78-81页 |
| 2.2.5 STRADα-LKB1和MCAK相互作用 | 第81-86页 |
| 2.2.6 MCAK是LKB1激酶的底物 | 第86-89页 |
| 2.2.7 LKB1激酶能磷酸化MCAK而抑制其微管解聚活性 | 第89-92页 |
| 2.2.8 动点上稳定表达LKB1影响了纺锤体的动态性 | 第92-94页 |
| 2.2.9 STRADa-LKB1通过调节MCAK来调控细胞有丝分裂 | 第94-96页 |
| 2.2.10 LKB1与PLK1协同调节有丝分裂细胞内MCAK活性 | 第96-98页 |
| 2.2.11 STRADa-LKB1复合物其他功能初探 | 第98-104页 |
| 2.3 讨论及计划 | 第104-106页 |
| 第3章 AMPKα-pT172的动点定位及调控 | 第106-125页 |
| 3.1 引言 | 第106页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第106-123页 |
| 3.2.1 AMPKα-pT172特异定位在动点上 | 第106-111页 |
| 3.2.2 AMPKα-pT172的动点定位受到PLK1的调控 | 第111-115页 |
| 3.2.3 AMPKα-pT172在体外不是PLK1的直接底物 | 第115-117页 |
| 3.2.4 LKB1和CAMKKβ调控AMPKα-pT172的动点定位 | 第117-120页 |
| 3.2.5 PLK1和LKB1及CAMKKβ协同调控AMPKa-pT172的动点定位 | 第120-123页 |
| 3.3 讨论与计划 | 第123-125页 |
| 第4章 材料与方法 | 第125-148页 |
| 4.1 实验材料 | 第125-128页 |
| 4.1.1 载体 | 第125页 |
| 4.1.2 质粒 | 第125-126页 |
| 4.1.3 细胞株 | 第126页 |
| 4.1.4 试剂 | 第126-128页 |
| 4.2 分子克隆 | 第128-132页 |
| 4.2.1 制备扩增质粒的E.coli感受态细胞 | 第128页 |
| 4.2.2 简易制备表达蛋白的E.coli感受态细胞 | 第128-129页 |
| 4.2.3 质粒转化 | 第129页 |
| 4.2.4 质粒DNA的小量抽提 | 第129-130页 |
| 4.2.5 质粒的试剂盒柱抽方法 | 第130页 |
| 4.2.6 PCR以及定点突变 | 第130-131页 |
| 4.2.7 DNA重组 | 第131-132页 |
| 4.3 蛋白表达及体外生化实验 | 第132-139页 |
| 4.3.1 GST-tag蛋白的纯化 | 第132-133页 |
| 4.3.2 His-tag蛋白的纯化 | 第133页 |
| 4.3.3 MBP-tag蛋白的纯化 | 第133-134页 |
| 4.3.4 Pull down实验 | 第134页 |
| 4.3.5 免疫沉降实验 | 第134-135页 |
| 4.3.6 免疫印迹实验 | 第135-136页 |
| 4.3.7 免疫印迹膜的重复使用 | 第136页 |
| 4.3.8 体外磷酸化实验 | 第136页 |
| 4.3.9 银染 | 第136-137页 |
| 4.3.10 体外微管沉降实验 | 第137-138页 |
| 4.3.11 微管解聚酶MCAK蛋白的表达纯化 | 第138-139页 |
| 4.3.12 体外微管解聚实验 | 第139页 |
| 4.4 细胞相关实验 | 第139-143页 |
| 4.4.1 磷酸钙转染 | 第139-140页 |
| 4.4.2 脂质体转染质粒 | 第140页 |
| 4.4.3 脂质体转染siRNA | 第140页 |
| 4.4.4 Fugene 6转染方法 | 第140-141页 |
| 4.4.5 稳转细胞株的构建 | 第141页 |
| 4.4.6 免疫荧光 | 第141-142页 |
| 4.4.7 活细胞成像 | 第142页 |
| 4.4.8 细胞内微管再生长实验 | 第142页 |
| 4.4.9 细胞冷处理实验 | 第142-143页 |
| 4.4.10 染色体甩片实验 | 第143页 |
| 4.4.11 FRET的体外测量 | 第143页 |
| 4.5 荧光定量PCR | 第143-145页 |
| 4.5.1 RNase-free的相关材料准备 | 第144页 |
| 4.5.2 RNA的提取 | 第144页 |
| 4.5.3 反转录PCR | 第144-145页 |
| 4.5.4 荧光定量PCR | 第145页 |
| 4.6 酵母共转 | 第145-146页 |
| 4.7 数据编辑应用软件及相关网址 | 第146-148页 |
| 参考文献 | 第148-174页 |
| 在读期间发表论文情况及取得的研究成果 | 第174-175页 |
| 致谢 | 第175页 |
