| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-34页 |
| 1.1 他汀类药物概况 | 第11-13页 |
| 1.2 他汀类药物合成研究进展 | 第13-21页 |
| 1.2.1 他汀类药物合成概述 | 第13-15页 |
| 1.2.2 他汀类药物手性中间体的合成 | 第15-21页 |
| 1.3 他汀类药物手性中间体生物催化合成 | 第21-28页 |
| 1.3.1 单手性中间体的合成 | 第21-23页 |
| 1.3.2 双手性中间体的合成 | 第23-28页 |
| 1.4 蛋白质的定向进化 | 第28-31页 |
| 1.4.1 突变文库构建策略 | 第29-31页 |
| 1.5 本课题研究思路与主要研究内容 | 第31-34页 |
| 第二章 高通量筛选方法的建立及高效DERA的筛选 | 第34-54页 |
| 2.1 引言 | 第34-36页 |
| 2.2 实验材料和方法 | 第36-45页 |
| 2.2.1 主要实验仪器 | 第36页 |
| 2.2.2 实验材料与试剂 | 第36-38页 |
| 2.2.3 实验方法 | 第38-45页 |
| 2.3 实验结果和分析 | 第45-52页 |
| 2.3.1 高通量筛选方法的建立 | 第45-46页 |
| 2.3.2 氯乙醛浓度-吸光度的标准曲线建立 | 第46页 |
| 2.3.3 DERA_(Eco)(F200I)十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验 | 第46-47页 |
| 2.3.4 氯乙醛与2,4-二硝基苯肼衍生物528nm处特异性吸收峰检测准确性验证 | 第47-49页 |
| 2.3.5 DERA_(Eco)、DERA_(Eco)(F200I)、DERA_(Pya)催化活性的对比 | 第49-50页 |
| 2.3.6 E.coli DH5α/pET28a(+)-DERA_(Pya)的pET28a(+)-DERA_(Pya)质粒的提取 | 第50页 |
| 2.3.7 PCR易错文库的构建与高效DERA的筛选 | 第50-52页 |
| 2.4 本章小结 | 第52-54页 |
| 第三章 DERA工程表达菌株商密度发酵的条件优化 | 第54-61页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 实验材料和方法 | 第54-57页 |
| 3.2.1 主要实验仪器 | 第54页 |
| 3.2.2 实验材料与试剂 | 第54-55页 |
| 3.2.3 试验方法 | 第55-57页 |
| 3.3 实验结果和分析 | 第57-60页 |
| 3.3.1 诱导时机对重组菌酶蛋白表达量的影响 | 第57-58页 |
| 3.3.2 IPTG终浓度对重组菌酶蛋白表达量的影响 | 第58页 |
| 3.3.3 pH对重组菌酶蛋白表达量的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.4 温度对重组菌酶蛋白表达量的影响 | 第59页 |
| 3.3.5 诱导时间对重组菌酶蛋白表达量的影响 | 第59页 |
| 3.3.6 E.coli BL21/pET28a(+)-DERAPya(I174V,V187I)菌的发酵罐发酵产酶 | 第59-60页 |
| 3.4 本章小结 | 第60-61页 |
| 第四章 DERA催化氯乙醛与乙醛醇醛缩合反应工艺的优化 | 第61-67页 |
| 4.1 引言 | 第61页 |
| 4.2 实验材料和方法 | 第61-63页 |
| 4.2.1 主要实验仪器 | 第61页 |
| 4.2.2 实验材料与试剂 | 第61-62页 |
| 4.2.3 实验方法 | 第62-63页 |
| 4.3 实验结果和分析 | 第63-65页 |
| 4.3.1 缓冲体系对反应的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.2 pH对反应的影响 | 第64页 |
| 4.3.3 反应温度对反应的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.4 手性中间体(4R,6S)-2,4-二羟基-6-氯甲基吡喃的制备 | 第65页 |
| 4.4 本章小结 | 第65-67页 |
| 第五章 (4R,6S)-2,4-二羟基-6-氯甲基吡喃的选择性氧化及产物纯化工艺的研究57 | 第67-72页 |
| 5.1 引言 | 第67-68页 |
| 5.2 实验材料和方法 | 第68-69页 |
| 5.2.1 主要实验仪器 | 第68页 |
| 5.2.2 实验材料与试剂 | 第68页 |
| 5.2.3 试验方法 | 第68-69页 |
| 5.3 实验结果和分析 | 第69-71页 |
| 5.3.1 氧化后的黄色油状物质及纯化后气质联用图分析 | 第69-71页 |
| 5.3.2 (4R,6S)-2,4-二羟基-6-氯甲基吡喃氧化及氧化后产物纯化的综合收率 | 第71页 |
| 5.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第六章 结论与展望 | 第72-74页 |
| 6.1 结论 | 第72-73页 |
| 6.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
