| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-29页 |
| 1 种子的干燥脱水研究进展 | 第13-19页 |
| 1.1 种子发育与脱水干燥 | 第13-14页 |
| 1.2 种子脱水耐性的获得及其生理学特征 | 第14-16页 |
| 1.3 耐脱水性对种子萌发的影响 | 第16-17页 |
| 1.4 种子耐脱水性与LEA蛋白 | 第17-19页 |
| 2 脱水素的研究进展 | 第19-23页 |
| 2.1 脱水素结构与作用机理 | 第19-21页 |
| 2.2 脱水素的定位 | 第21页 |
| 2.3 脱水素RAB17蛋白及其功能网络 | 第21-23页 |
| 3 蛋白质组学的现状 | 第23-27页 |
| 3.1 蛋白质组学的研究内容 | 第24-25页 |
| 3.2 蛋白质间的相互作用 | 第25页 |
| 3.3 蛋白质组学的常用研究方法 | 第25-27页 |
| 3.3.1 双向电泳 | 第26页 |
| 3.3.2 质谱技术 | 第26-27页 |
| 3.3.3 亲和层析-质谱 | 第27页 |
| 4、本实验的研究目的与意义 | 第27-29页 |
| 第二章 种子干燥后熟过程胚和胚乳的蛋白质组分析 | 第29-44页 |
| 1 材料与方法 | 第29-33页 |
| 1.1 材料 | 第29页 |
| 1.2 方法 | 第29-33页 |
| 1.2.1 蛋白质样品的制备 | 第30页 |
| 1.2.2 样品的浓度测定 | 第30-31页 |
| 1.2.3 蛋白质单向电泳 | 第31-32页 |
| 1.2.4 蛋白质双向电泳 | 第32-33页 |
| 1.2.5 凝胶图像扫描与分析 | 第33页 |
| 1.2.6 蛋白质的质谱鉴定与数据库查询 | 第33页 |
| 2 结果与分析 | 第33-40页 |
| 2.1 种子胚和胚乳的蛋白质浓度测定 | 第33-34页 |
| 2.2 种子胚和胚乳的单向电泳检测 | 第34页 |
| 2.3 种子胚和胚乳的双向电泳图谱分析 | 第34-36页 |
| 2.4 种子胚和胚乳的差异表达蛋白鉴定 | 第36-40页 |
| 3 分析与讨论 | 第40-44页 |
| 3.1 种子胚中RAB17蛋白干燥后熟过程的表达差异 | 第40-41页 |
| 3.2 种子胚和胚乳干燥后熟过程中差异蛋白分析 | 第41-43页 |
| 3.2.1 逆境胁迫响应蛋白 | 第41-42页 |
| 3.2.2 代谢相关蛋白 | 第42页 |
| 3.2.3 贮藏蛋白 | 第42-43页 |
| 3.3 种子干燥后熟与胚和胚乳差异蛋白相关关系探讨 | 第43-44页 |
| 第三章 RAB17蛋白的原核表达和互作蛋白筛选分析 | 第44-72页 |
| 1 材料与方法 | 第44-54页 |
| 1.1 材料 | 第44-45页 |
| 1.2 实验方法 | 第45-54页 |
| 1.2.1 rab17基因的克隆 | 第45-48页 |
| 1.2.1.1 引物设计 | 第45-46页 |
| 1.2.1.2 玉米胚RNA的提取 | 第46-47页 |
| 1.2.1.3 玉米籽粒胚cDNA的合成 | 第47页 |
| 1.2.1.4 rab17基因CDS区的克隆 | 第47-48页 |
| 1.2.2 RAB17蛋白的表达 | 第48-50页 |
| 1.2.2.1 原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 1.2.2.2 RAB17蛋白的诱导表达 | 第49-50页 |
| 1.2.2.3 RAB17蛋白的纯化 | 第50页 |
| 1.2.3 RAB17互作蛋白的筛选 | 第50-53页 |
| 1.2.3.1 玉米胚蛋白样品的制备 | 第50-51页 |
| 1.2.3.2 RAB17蛋白亲和柱的制备 | 第51页 |
| 1.2.3.3 RAB17蛋白亲和层析 | 第51-52页 |
| 1.2.3.4 筛选蛋白的电泳分析 | 第52-53页 |
| 1.2.4 互作蛋白cDNA的克隆 | 第53-54页 |
| 1.2.4.1 引物设计 | 第53页 |
| 1.2.4.2 CDS区的克隆 | 第53-54页 |
| 1.2.5 互作蛋白的原核表达 | 第54页 |
| 1.2.5.1 原核表达载体的构建 | 第54页 |
| 1.2.5.2 互作蛋白的原核诱导表达与分析 | 第54页 |
| 2 结果与分析 | 第54-69页 |
| 2.1 RAB17蛋白生物信息学分析 | 第54-56页 |
| 2.2 rab17基因克隆 | 第56-58页 |
| 2.2.1 玉米胚总RNA | 第56-57页 |
| 2.2.2 rab17基因CDS区的克隆 | 第57-58页 |
| 2.3 RAB17蛋白的原核表达 | 第58-64页 |
| 2.3.1 rab17原核表达载体的构建 | 第58页 |
| 2.3.2 rab17原核表达的生物信息学分析 | 第58-62页 |
| 2.3.3 RAB17的诱导表达 | 第62-63页 |
| 2.3.4 RAB17的纯化 | 第63-64页 |
| 2.4 RAB17互作蛋白筛选与分析 | 第64-66页 |
| 2.4.1 RAB17互作蛋白的SDS-PAGE分析 | 第64-65页 |
| 2.4.2 捕获蛋白的双向电泳及质谱鉴定分析 | 第65-66页 |
| 2.5 互作蛋白的cDNA克隆和原核表达 | 第66-69页 |
| 2.5.1 互作蛋白的cDNA克隆和分析 | 第66-67页 |
| 2.5.2 互作蛋白原核表达载体的构建和原核表达 | 第67-68页 |
| 2.5.3 互作蛋白的生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 3 讨论 | 第69-72页 |
| 3.1 rab17表达差异性 | 第69-70页 |
| 3.2 rab17具有等位基因多样性 | 第70页 |
| 3.3 RAB17蛋白可溶性和热稳定性 | 第70页 |
| 3.4 RAB17生物信息学分析疑似互作蛋白及其功能 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-80页 |
| 致谢 | 第80页 |
