| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 缩略语及中英文对照 | 第7-12页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 U-box泛素连接酶功能研究进展 | 第12-19页 |
| 1.1.1 U-box泛素连接酶 | 第12页 |
| 1.1.2 U-box泛素连接酶参与植物非生物胁迫应答 | 第12-14页 |
| 1.1.3 U-box泛素连接酶参与植物生物胁迫应答 | 第14-17页 |
| 1.1.4 U-box泛素连接酶参与植物生长发育 | 第17-18页 |
| 1.1.5 U-box蛋白参与植物激素、茉莉酸和水杨酸调控通路 | 第18-19页 |
| 1.2 葡萄转基因体系 | 第19-22页 |
| 1.2.1 葡萄转基因方法 | 第19-21页 |
| 1.2.2 转基因葡萄的鉴定方法 | 第21-22页 |
| 1.2.3 Microvine葡萄转基因体系 | 第22页 |
| 1.3 本研究的目的和意义 | 第22-23页 |
| 第二章 葡萄U-box蛋白基因PUB的克隆、序列和表达分析 | 第23-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-29页 |
| 2.1.1 植物材料和霜霉菌 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器与设备 | 第23页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.4 供试引物 | 第24页 |
| 2.1.5 葡萄叶片DNA提取(CTAB法) | 第24-25页 |
| 2.1.6 基因扩增和鉴定 | 第25-26页 |
| 2.1.7 序列分析 | 第26页 |
| 2.1.8 实验材料处理 | 第26-27页 |
| 2.1.9 cDNA制备 | 第27-28页 |
| 2.1.10 实时荧光定量PCR(qPCR) | 第28页 |
| 2.1.11 PUB基因上游序列扩增 | 第28-29页 |
| 2.2 结果 | 第29-36页 |
| 2.2.1 山葡萄U-box蛋白基因VaPUB的克隆与序列分析 | 第29页 |
| 2.2.2 VaPUB的多序列比对分析 | 第29-31页 |
| 2.2.3 VaPUB在山葡萄'左山一'中的表达分析 | 第31-32页 |
| 2.2.4 低温胁迫下PUB在不同葡萄品种中的表达模式 | 第32-33页 |
| 2.2.5 霜霉菌处理下PUB在不同葡萄品种中的表达模式 | 第33-35页 |
| 2.2.6 SA/ABA/FL处理下PUB在不同葡萄品种中的表达模式 | 第35页 |
| 2.2.7 PUB基因上游序列的扩增与分析 | 第35-36页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第36-39页 |
| 第三章 过表达VaPUB对拟南芥抗逆性的影响 | 第39-57页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-47页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 实验仪器与设备 | 第39-40页 |
| 3.1.3 实验试剂 | 第40页 |
| 3.1.4 供试引物 | 第40-41页 |
| 3.1.5 Gateway重组质粒的构建 | 第41-44页 |
| 3.1.6 农杆菌电击法感受态制备 | 第44页 |
| 3.1.7 电击法转化农杆菌 | 第44页 |
| 3.1.8 农杆菌菌落PCR | 第44-45页 |
| 3.1.9 农杆菌介导的花絮浸沾法转化拟南芥 | 第45页 |
| 3.1.10 拟南芥阳性植株的筛选 | 第45页 |
| 3.1.11 低温胁迫 | 第45-46页 |
| 3.1.12 盐胁迫 | 第46页 |
| 3.1.13 干旱胁迫 | 第46页 |
| 3.1.14 霜霉菌处理 | 第46页 |
| 3.1.15 根系的观察与测量 | 第46-47页 |
| 3.2 结果 | 第47-55页 |
| 3.2.1 VaPUB入门载体、表达载体构建和鉴定 | 第47-48页 |
| 3.2.2 VaPUB转基因拟南芥的鉴定 | 第48-49页 |
| 3.2.3 VaPUB转基因拟南芥的抗寒性 | 第49-52页 |
| 3.2.4 VaPUB转基因拟南芥的耐盐性 | 第52-53页 |
| 3.2.5 VaPUB转基因拟南芥的耐旱性 | 第53-54页 |
| 3.2.6 VaPUB转基因拟南芥对霜霉病的抗性 | 第54页 |
| 3.2.7 VaPUB基因对拟南芥根系生长的影响 | 第54-55页 |
| 3.3 小结与讨论 | 第55-57页 |
| 第四章 过表达VaPUB对Vitis vinifera 'Thompson Seedless'_的影响 | 第57-77页 |
| 4.1 材料与方法 | 第57-65页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第57页 |
| 4.1.2 实验仪器与设备 | 第57-58页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第58页 |
| 4.1.4 供试引物 | 第58-59页 |
| 4.1.5 葡萄叶片瞬时转化 | 第59页 |
| 4.1.6 农杆菌介导的葡萄胚性愈伤组织的遗传转化 | 第59-60页 |
| 4.1.7 转基因植株的鉴定 | 第60-62页 |
| 4.1.8 石蜡切片的制备和观察 | 第62页 |
| 4.1.9 气孔观察 | 第62-63页 |
| 4.1.10 叶绿素含量测定 | 第63页 |
| 4.1.11 苯胺蓝染色 | 第63页 |
| 4.1.12 材料处理 | 第63页 |
| 4.1.13 双向凝胶电泳和质谱检测 | 第63-65页 |
| 4.1.14 荧光定量PCR (qPCR) | 第65页 |
| 4.2 结果 | 第65-75页 |
| 4.2.1 瞬时转化VaPUB的葡萄叶片对霜霉病的抗性 | 第65页 |
| 4.2.2 VaPUB转基因Vitis vinifera 'Thompson Seedless'的获得和鉴定 | 第65-68页 |
| 4.2.3 转基因葡萄叶片结构观察 | 第68-69页 |
| 4.2.4 转基因葡萄对霜霉病的抗性 | 第69页 |
| 4.2.5 转基因葡萄叶片差异蛋白检测 | 第69-73页 |
| 4.2.6 PR10家族基因在转基因葡萄中的表达模式 | 第73-75页 |
| 4.3 小结与讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 VaPUB亚细胞定位和Microvine转基因株系的获得 | 第77-91页 |
| 5.1 材料与方法 | 第77-84页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第77页 |
| 5.1.2 实验仪器与设备 | 第77页 |
| 5.1.3 实验试剂 | 第77-78页 |
| 5.1.4 供试引物 | 第78页 |
| 5.1.5 亚细胞定位入门载体和表达载体的构建 | 第78页 |
| 5.1.6 基因枪法转化洋葱表皮细胞 | 第78-79页 |
| 5.1.7 cDNA文库构建 | 第79-81页 |
| 5.1.8 酵母双杂交 | 第81-82页 |
| 5.1.9 农杆菌介导的Microvine遗传转化 | 第82-83页 |
| 5.1.10 培养基配置 | 第83-84页 |
| 5.1.11 抗性Microvine转化苗的PCR鉴定 | 第84页 |
| 5.2 结果 | 第84-89页 |
| 5.2.1 VaPUB的洋葱表皮亚细胞定位 | 第84-85页 |
| 5.2.2 霜霉菌cDNA文库的构建 | 第85-86页 |
| 5.2.3 酵母双杂交 | 第86页 |
| 5.2.4 农杆菌的鉴定 | 第86-87页 |
| 5.2.5 农杆菌介导的Microvine转化 | 第87-88页 |
| 5.2.6 Microvine转化苗的鉴定 | 第88-89页 |
| 5.3 小结与讨论 | 第89-91页 |
| 总结与展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 致谢 | 第105-106页 |
| 作者简介 | 第106页 |
