| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-23页 |
| 1.1 乳腺癌 | 第13-16页 |
| 1.1.1 乳腺癌现状 | 第13-14页 |
| 1.1.2 乳腺癌的分类 | 第14页 |
| 1.1.3 乳腺癌的治疗 | 第14-16页 |
| 1.2 HER-2 | 第16-19页 |
| 1.2.1 HER-2 简介 | 第16-17页 |
| 1.2.2 HER-2 与乳腺癌 | 第17-18页 |
| 1.2.3 HER-2 与乳腺癌治疗 | 第18-19页 |
| 1.3 免疫毒素 | 第19-21页 |
| 1.3.1 免疫毒素简介 | 第20页 |
| 1.3.2 导向载体 | 第20页 |
| 1.3.3 效应分子 | 第20-21页 |
| 1.4 本文立题依据 | 第21-23页 |
| 第2章 免疫毒素scFv-Mmut的毕赤酵母表达体系的建立 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.1.1 仪器与设备 | 第23页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第23-24页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.4 培养基 | 第24-25页 |
| 2.1.5 相关溶液的配置 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 酵母表达质粒p PIC9K/scFv-Mmut的构建 | 第26页 |
| 2.2.2 p PIC9K/scFv-Mmut的提取与鉴定 | 第26-28页 |
| 2.2.3 p PIC9K/scFv-Mmut转化到毕赤酵母GS115 | 第28-29页 |
| 2.2.4 高拷贝转化子的筛选 | 第29页 |
| 2.2.5 高拷贝转化子的摇瓶发酵 | 第29-30页 |
| 2.2.6 PCR鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.7 工程菌株表达时间的选择 | 第32页 |
| 2.2.8 scFv-Mmut目的蛋白的纯化 | 第32页 |
| 2.2.9 scFv-Mmut目的蛋白的含量测定 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果 | 第33-39页 |
| 2.3.1 p PIC9K/scFv-Mmut的提取与鉴定 | 第33-34页 |
| 2.3.2 质粒DNA p PIC9K/scFv-Mmut的线性化 | 第34-35页 |
| 2.3.3 利用MD/MM平板鉴定毕赤酵母重组子 | 第35页 |
| 2.3.4 高拷贝转化子的筛选 | 第35页 |
| 2.3.5 SDS-PAGE电泳筛选工程菌 | 第35-36页 |
| 2.3.6 PCR鉴定 | 第36页 |
| 2.3.7 工程菌株表达时间的选择 | 第36-37页 |
| 2.3.8 scFv-Mmut的纯化 | 第37-38页 |
| 2.3.9 scFv-Mmut的含量测定 | 第38-39页 |
| 第3章 scFv-Mmut对乳腺癌细胞抑制作用研究 | 第39-54页 |
| 3.1 实验材料 | 第39-41页 |
| 3.1.1 仪器与设备 | 第39页 |
| 3.1.2 细胞株 | 第39-40页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第40页 |
| 3.1.4 相关溶液配制 | 第40-41页 |
| 3.2 实验方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第41页 |
| 3.2.2 体外检测scFv-Mmut对HER-2 阳性乳腺癌细胞株BT474的抑制作用 | 第41-43页 |
| 3.2.3 体外检测scFv-Mmut对HER-2 阴性乳腺癌细胞株MCF-7的抑制作用 | 第43页 |
| 3.2.4 DNA ladder检测细胞凋亡 | 第43页 |
| 3.2.5 DAPI染色观察细胞形态变化 | 第43-44页 |
| 3.2.6 流式细胞仪检测细胞周期 | 第44-45页 |
| 3.2.7 检测scFv-Mmut在细胞中的分布 | 第45-46页 |
| 3.3 实验结果 | 第46-54页 |
| 3.3.1 scFv-Mmut对BT474细胞的抑制作用 | 第46-48页 |
| 3.3.2 scFv-Mmut对MCF-7 细胞的抑制作用 | 第48-50页 |
| 3.3.3 DNA ladder实验 | 第50-51页 |
| 3.3.4 DAPI染色观察细胞形态 | 第51-52页 |
| 3.3.5 流式细胞仪检测细胞周期 | 第52页 |
| 3.3.6 激光共聚焦法观察scFv-Mmut在细胞中的分布 | 第52-54页 |
| 第4章 讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
