| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第11-16页 |
| 1.1 羧肽酶Y概述 | 第11-12页 |
| 1.2 蛋白质水解及质谱鉴定 | 第12-14页 |
| 1.3 多发性骨髓瘤凋亡 | 第14-16页 |
| 第二章 羧肽酶Y标记蛋白质C端和正向分离蛋白质C端多肽 | 第16-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-21页 |
| 2.1.1 实验样品 | 第16页 |
| 2.1.2 实验试剂 | 第16-17页 |
| 2.1.3 主要试剂的配置 | 第17-20页 |
| 2.1.4 实验仪器 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.2.1 甲基酯化 | 第21页 |
| 2.2.2 多肽和蛋白的羧基端生物素标记 | 第21-22页 |
| 2.2.3 SDS含量对生物素标记反应效率的影响 | 第22页 |
| 2.2.4 复溶缓冲液中SDS的含量对甲基酯化BL21全蛋白样品复溶的影响 | 第22-23页 |
| 2.2.5 SDS-PAGE、银染和胶内胰酶酶解 | 第23页 |
| 2.2.6 质谱样品的准备 | 第23-24页 |
| 2.2.7 MALDI-TOF-MS和LC-MS/MS检测 | 第24页 |
| 2.2.8 数据分析 | 第24-25页 |
| 2.2.9 生物信息学分析 | 第25页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第25-35页 |
| 2.3.1 生物素标记最佳p H的测定 | 第25-26页 |
| 2.3.2 生物素标记最佳SDS浓度的测定 | 第26-28页 |
| 2.3.3 利用羧肽酶Y标记蛋白质C端和正向分离蛋白质羧基端多肽 | 第28-30页 |
| 2.3.4 利用优化后的Pro C-TEL技术鉴定复杂蛋白样品BL21全蛋白水解位点 | 第30-34页 |
| 2.3.5 E. coli全蛋白样品鉴定结果的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.4 结论 | 第35-36页 |
| 第三章 多发性骨髓瘤OPM2细胞凋亡过程中蛋白水解的鉴定 | 第36-47页 |
| 3.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.1.1 实验样品 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 3.1.3 实验仪器 | 第36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36-39页 |
| 3.2.1 多发性骨髓瘤OPM2细胞凋亡实验 | 第36-38页 |
| 3.2.2 羧肽酶Y标记多发性骨髓瘤OPM2细胞全蛋白复杂样品 | 第38-39页 |
| 3.2.3 胶内酶解和亲和纯化生物素标记多肽 | 第39页 |
| 3.2.4 LC-MS/MS检测 | 第39页 |
| 3.2.5 数据分析 | 第39页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第39-46页 |
| 3.3.1 多发性骨髓瘤OPM2细胞凋亡实验 | 第39-42页 |
| 3.3.2 OPM2凋亡诱导和生物素标记效率验证 | 第42-44页 |
| 3.3.3 多发性骨髓瘤OPM2细胞凋亡中蛋白水解的质谱鉴定 | 第44-46页 |
| 3.4 结论 | 第46-47页 |
| 第四章 探索CPY突变体在羧肽酶标记蛋白质C端中的应用 | 第47-64页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第47-50页 |
| 4.1.1 实验样品 | 第47页 |
| 4.1.2 实验试剂 | 第47-48页 |
| 4.1.3 主要试剂的配置 | 第48-50页 |
| 4.1.4 实验仪器 | 第50页 |
| 4.2 实验方法 | 第50-58页 |
| 4.2.1 野生型和突变体羧肽酶Y原核载体构建和单克隆筛选 | 第50-51页 |
| 4.2.2 野生型以及突变体羧肽酶Y的原核表达 | 第51-52页 |
| 4.2.3 用原核表达的野生型和突变体羧肽酶Y标记蛋白 | 第52-53页 |
| 4.2.4 野生型和突变体羧肽酶Y的真核表达 | 第53-58页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第58-62页 |
| 4.3.1 野生型和突变体CPY的原核表达及纯化验证 | 第58-60页 |
| 4.3.2 用原核表达的野生型及突变体羧肽酶Y对蛋白质C端进行生物素标记 | 第60页 |
| 4.3.3 野生型及突变体羧肽酶Y的真核表达 | 第60-61页 |
| 4.3.4 野生型及突变体羧肽酶Y的真核表达 | 第61-62页 |
| 4.4 结论 | 第62-64页 |
| 参考文献 | 第64-69页 |
| 综述 | 第69-76页 |
| 参考文献 | 第74-76页 |
| 攻读学位期间出版或公开发表的论著、论文 | 第76-77页 |
| 中英语缩略词对照表 | 第77-78页 |
| 附录 | 第78-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
