| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 一 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 扁蓿豆 | 第10-12页 |
| 1.1.1 扁蓿豆的生物学特性 | 第10页 |
| 1.1.2 扁蓿豆的遗传多样性 | 第10-11页 |
| 1.1.3 扁蓿豆的生理抗逆性 | 第11-12页 |
| 1.2 SKIP基因的研究概况 | 第12-13页 |
| 1.3 植物对非生物逆境胁迫的研究 | 第13-15页 |
| 1.3.1 非生物逆境对植物形态结构的影响 | 第14页 |
| 1.3.2 非生物逆境对植物代谢调控的影响 | 第14-15页 |
| 1.3.3 植物抗非生物逆境胁迫应答分子机制的简介 | 第15页 |
| 1.4 Trans-Acting siRNA的简介 | 第15-16页 |
| 1.5 基因克隆方案 | 第16-19页 |
| 1.5.1 RACE技术简介 | 第16-17页 |
| 1.5.2 基因的图位克隆法 | 第17-18页 |
| 1.5.3 Gateway大规模克隆技术 | 第18页 |
| 1.5.4 转座子标签法克隆基因 | 第18-19页 |
| 1.6 本研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 二 材料与方法 | 第20-36页 |
| 2.1 材料 | 第20-21页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 植物培养基 | 第20页 |
| 2.1.3 菌种和质粒 | 第20页 |
| 2.1.4 实验试剂 | 第20页 |
| 2.1.5 引物设计 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-36页 |
| 2.2.1 扁蓿豆幼苗的培育 | 第21-22页 |
| 2.2.2 扁蓿豆总RNA提取 | 第22页 |
| 2.2.3 扁蓿豆总DNA的提取 | 第22-23页 |
| 2.2.4 扁蓿豆SKIP基因的中间保守片段的克隆 | 第23-27页 |
| 2.2.5 SKIP基因的RACE扩增与克隆 | 第27-30页 |
| 2.2.6 扁蓿豆SKIP基因的cDNA与DNA全长序列的克隆 | 第30-31页 |
| 2.2.7 扁蓿豆MrSKIP基因表达特性的分析 | 第31-32页 |
| 2.2.8 扁蓿豆SKIP基因编码蛋白的生物信息学分析 | 第32页 |
| 2.2.9 构建表达载体 | 第32-34页 |
| 2.2.10 毛根转化将外源基因转化截型苜蓿根组织 | 第34-36页 |
| 三 结果与分析 | 第36-58页 |
| 3.1 提取扁蓿豆DNA | 第36页 |
| 3.2 提取扁蓿豆总RNA | 第36-37页 |
| 3.3 扁蓿豆SKIP同源基因的克隆 | 第37-45页 |
| 3.3.1 SKIP基因中间片段的克隆 | 第37-39页 |
| 3.3.2 3'RACE | 第39-40页 |
| 3.3.3 5'RACE | 第40-41页 |
| 3.3.4 SKIP基因cDNA全长的PCR扩增 | 第41-45页 |
| 3.4 MrSKIP基因表达特性的分析 | 第45-46页 |
| 3.5 扁蓿豆基因组中MrSKIP基因的分析 | 第46页 |
| 3.6 MrSKIP基因生物信息学分析分析 | 第46-52页 |
| 3.6.1 MrSKIP基因片段的同源性分析 | 第46-47页 |
| 3.6.2 MrSKIP基因编码蛋白的理化性质分析 | 第47-48页 |
| 3.6.3 磷酸化位点预测 | 第48页 |
| 3.6.4 二级结构预测 | 第48-49页 |
| 3.6.5 保守结构域的分析 | 第49页 |
| 3.6.6 亲疏水性分析 | 第49-50页 |
| 3.6.7 跨膜结构的预测 | 第50页 |
| 3.6.8 MrSKIP蛋白亚细胞定位预测 | 第50-51页 |
| 3.6.9 MrSKIP信号肽预测 | 第51-52页 |
| 3.6.10 扁蓿豆MrSKIP系统进化树分析 | 第52页 |
| 3.7 构建表达载体 | 第52-55页 |
| 3.7.1 入门载体构建 | 第53-54页 |
| 3.7.2 表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.8 扁蓿豆MrSKIP基因抗逆特性分析 | 第55-58页 |
| 四 结论与讨论 | 第58-61页 |
| 4.1 讨论 | 第58-60页 |
| 4.2 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
