| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第14-39页 |
| 1.1 课题来源 | 第14页 |
| 1.2 课题背景及研究的目的与意义 | 第14-18页 |
| 1.2.1 CO_2的减排 | 第14-15页 |
| 1.2.2 能源需求 | 第15-17页 |
| 1.2.3 研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 1.3 固定CO_2富油微藻的研究现状 | 第18-29页 |
| 1.3.1 微藻的筛选与培养 | 第18-22页 |
| 1.3.2 微藻固定CO_2机理研究 | 第22-26页 |
| 1.3.3 固定CO_2微藻培养技术的应用 | 第26-29页 |
| 1.4 固定CO_2微藻的基因工程研究 | 第29-37页 |
| 1.4.1 微藻的基因组项目及转化研究 | 第29-30页 |
| 1.4.2 选择标记基因 | 第30页 |
| 1.4.3 转化载体及启动子 | 第30-31页 |
| 1.4.4 真核微藻的转化方法 | 第31-32页 |
| 1.4.5 真核微藻的遗传转化研究进展 | 第32-34页 |
| 1.4.6 RNAi诱导的基因沉默 | 第34-37页 |
| 1.5 课题的主要研究内容 | 第37-38页 |
| 1.6 本课题研究的技术路线 | 第38-39页 |
| 第2章 试验材料与方法 | 第39-58页 |
| 2.1 试验材料 | 第39-45页 |
| 2.1.1 藻种来源 | 第39-40页 |
| 2.1.2 培养基 | 第40-42页 |
| 2.1.3 微藻培养装置 | 第42-44页 |
| 2.1.4 培养方法 | 第44页 |
| 2.1.5 仪器和设备及试剂 | 第44-45页 |
| 2.2 试验方法 | 第45-56页 |
| 2.2.1 质粒DNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.2 微拟球藻基因组DNA的提取 | 第46页 |
| 2.2.3 微拟球藻总RNA的提取 | 第46-47页 |
| 2.2.4 质粒构建引物及扩增体系 | 第47-51页 |
| 2.2.5 DNA印迹杂交(Southern Blot) | 第51-52页 |
| 2.2.6 蛋白印迹杂交(Western Blot) | 第52-54页 |
| 2.2.7 GUS染色方法 | 第54页 |
| 2.2.8 实时荧光定量PCR(Q-RT-PCR) | 第54-55页 |
| 2.2.9 微拟球藻的电击转化方法 | 第55-56页 |
| 2.2.10 藻细胞总脂的提取 | 第56页 |
| 2.3 分析方法 | 第56-58页 |
| 2.3.1 藻细胞油脂成分及含量的测定 | 第56页 |
| 2.3.2 藻细胞的生长和生物量的测定 | 第56页 |
| 2.3.3 藻细胞油脂的薄层层析分析 | 第56-57页 |
| 2.3.4 培养基N、P的测定 | 第57-58页 |
| 第3章 固定CO_2微拟球藻筛选与培养 | 第58-80页 |
| 3.1 引言 | 第58-59页 |
| 3.2 海水微拟球藻耐高CO_2的筛选与培养 | 第59-70页 |
| 3.2.1 六株藻在不同CO_2浓度下的生长 | 第59-61页 |
| 3.2.2 三株藻在不同CO_2浓度下生长及培养液p H值的变化 | 第61-64页 |
| 3.2.3 三株藻在不同CO_2浓度下的油脂积累分析 | 第64-70页 |
| 3.3 淡水湖泊微拟球藻耐亚硝态氮的培养 | 第70-79页 |
| 3.3.1 湖泊微拟球藻对亚硝酸盐的耐受及培养液p H值的变化 | 第70-73页 |
| 3.3.2 不同气体条件下对氮和磷的消耗 | 第73-76页 |
| 3.3.3 不同气体条件下总脂含量及脂肪酸组成 | 第76-79页 |
| 3.4 本章小结 | 第79-80页 |
| 第4章 微拟球藻快速高效遗传转化系统的建立 | 第80-98页 |
| 4.1 引言 | 第80-81页 |
| 4.2 高效启动子的克隆 | 第81-83页 |
| 4.2.1 β-tubulin启动区的扩增 | 第81-82页 |
| 4.2.2 β-tubulin启动区序列分析及系统发育树的构建 | 第82-83页 |
| 4.3 质粒转化载体及PCR转化产物的构建 | 第83-87页 |
| 4.3.1 七株藻质粒转化载体的构建 | 第83-86页 |
| 4.3.2 七株藻PCR转化产物的构建 | 第86-87页 |
| 4.4 微拟球藻的抗性基因电击转化及检测 | 第87-92页 |
| 4.4.1 微拟球藻的抗生素敏感测试 | 第87-88页 |
| 4.4.2 转化物的制备 | 第88-89页 |
| 4.4.3 微拟球藻抗性基因的转化 | 第89-90页 |
| 4.4.4 转化藻株的检测 | 第90-92页 |
| 4.5 微拟球藻遗传转化效率的比较 | 第92-93页 |
| 4.6 微拟球藻GUS报告基因的转化及检测 | 第93-97页 |
| 4.6.1 GUS基因转化载体的构建 | 第93-95页 |
| 4.6.2 GUS基因的PCR检测 | 第95-96页 |
| 4.6.3 GUS染色检测 | 第96-97页 |
| 4.7 本章小结 | 第97-98页 |
| 第5章 固定CO_2相关基因的转化及其功能研究 | 第98-115页 |
| 5.1 引言 | 第98-99页 |
| 5.2 碳酸酐酶RNAI转化载体的构建 | 第99-102页 |
| 5.3 碳酸酐酶RNAI载体的转化及检测 | 第102-107页 |
| 5.3.1 RNAi载体转化4株微拟球藻 | 第102-103页 |
| 5.3.2 转化子的检测 | 第103-104页 |
| 5.3.3 高CO_2浓度下转化子的初筛 | 第104-107页 |
| 5.4 高CO_2浓度下N.SALINA转基因株的油脂积累分析 | 第107-109页 |
| 5.5 微拟球藻固碳机理的分析 | 第109-114页 |
| 5.5.1 转化子CA基因转录分析 | 第109-111页 |
| 5.5.2 转化子碳酸酐酶的Western Blot分析 | 第111-112页 |
| 5.5.3 高浓度CO_2对N.salina碳酸酐酶活性的影响 | 第112-114页 |
| 5.6 本章小结 | 第114-115页 |
| 结论 | 第115-117页 |
| 参考文献 | 第117-131页 |
| 攻读博士期间发表的论文及其他成果 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
| 个人简历 | 第134-135页 |
