新城疫病毒融合蛋白纳米抗体的筛选与鉴定
| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 新城疫病毒研究进展 | 第11-15页 |
| 1.1.1 新城疫病毒的生物学特性 | 第11页 |
| 1.1.2 新城疫病毒的分子生物学特性 | 第11-13页 |
| 1.1.3 新城疫病毒的危害 | 第13-14页 |
| 1.1.4 新城疫的诊断 | 第14-15页 |
| 1.1.5 新城疫抗体研究进展 | 第15页 |
| 1.2 纳米抗体研究进展 | 第15-18页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构特点 | 第15-16页 |
| 1.2.2 纳米抗体的特性 | 第16-17页 |
| 1.2.3 纳米抗体的应用 | 第17-18页 |
| 1.3 酵母双杂交系统研究进展 | 第18-21页 |
| 1.3.1 酵母双杂交系统的组成与原理 | 第18-19页 |
| 1.3.2 酵母双杂交系统的优点 | 第19页 |
| 1.3.3 酵母双杂交系统的应用 | 第19-21页 |
| 第二章 双峰驼天然纳米抗体酵母双杂交文库的构建 | 第21-33页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第21页 |
| 2.1.2 实验试剂、菌株、载体及仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 引物设计 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要溶液 | 第22-23页 |
| 2.2 试验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 双峰驼样品采集 | 第23页 |
| 2.2.2 双峰驼外周血淋巴细胞的分离 | 第23-24页 |
| 2.2.3 总RNA提取及反转录 | 第24-25页 |
| 2.2.4 VHH片段的扩增 | 第25页 |
| 2.2.5 VHH片段的浓缩 | 第25-26页 |
| 2.2.6 纳米抗体文库的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.7 纳米抗体文库的质量鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.3.1 外周血淋巴细胞和免疫器官总RNA提取 | 第28页 |
| 2.3.2 VHH片段的扩增和浓缩 | 第28-29页 |
| 2.3.3 纳米抗体文库的质量鉴定 | 第29-31页 |
| 2.4 讨论 | 第31-32页 |
| 2.5 小结 | 第32-33页 |
| 第三章 新城疫病毒F蛋白靶向VHH的筛选 | 第33-42页 |
| 3.1 实验材料 | 第33-34页 |
| 3.1.1.实验试剂、毒株、载体及仪器 | 第33页 |
| 3.1.2 主要溶液 | 第33-34页 |
| 3.2 实验方法 | 第34-38页 |
| 3.2.1 诱饵重组质粒的构建 | 第34-36页 |
| 3.2.2 诱饵质粒的毒性和自激活检测 | 第36页 |
| 3.2.3 文库的筛选 | 第36-37页 |
| 3.2.4 阳性克隆的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-40页 |
| 3.3.1 诱饵重组质粒的构建 | 第38-39页 |
| 3.3.3 文库的筛选与鉴定 | 第39-40页 |
| 3.3.4 序列分析 | 第40页 |
| 3.4 讨论 | 第40-41页 |
| 3.5 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 VHH的表达与功能鉴定 | 第42-53页 |
| 4.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 4.1.1 实验试剂、菌株、病毒、载体及仪器 | 第42页 |
| 4.1.2 主要溶液的配制 | 第42-43页 |
| 4.2 实验方法 | 第43-46页 |
| 4.2.1 原核表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 4.2.2 VHH的表达与纯化 | 第44页 |
| 4.2.3 反应活性的测定 | 第44-45页 |
| 4.2.4 中和活性的测定 | 第45-46页 |
| 4.3 结果与分析 | 第46-51页 |
| 4.3.1 原核表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 4.3.2 VHH的表达与纯化 | 第47-48页 |
| 4.3.3 VHH反应活性的测定 | 第48-50页 |
| 4.3.4 VHH中和活性的测定 | 第50-51页 |
| 4.4 讨论 | 第51-52页 |
| 4.5 小结 | 第52-53页 |
| 结论 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-61页 |
| 附录 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 作者简介 | 第67页 |
