| 摘要 | 第4-7页 |
| Summary | 第7-10页 |
| 文献综述 | 第15-36页 |
| 第一章 体细胞核移植研究进展 | 第15-26页 |
| 1.1 体细胞核移植发展历程 | 第15-17页 |
| 1.2 提高体细胞核移植效率的措施 | 第17-22页 |
| 1.2.1 供体细胞 | 第17-19页 |
| 1.2.2 卵母细胞 | 第19页 |
| 1.2.3 表观遗传修饰 | 第19-21页 |
| 1.2.4 胚胎嵌合 | 第21-22页 |
| 1.3 牦牛体外受精及体细胞核移植研究进展 | 第22-26页 |
| 第二章 克隆胚胎核重编程研究进展 | 第26-36页 |
| 2.1 克隆胚胎的异常发育 | 第26-27页 |
| 2.2 克隆胚胎的基因表达模式 | 第27-28页 |
| 2.3 全基因组范围的DNA甲基化和组蛋白修饰 | 第28-31页 |
| 2.4 基因印记 | 第31页 |
| 2.5 X染色体失活 | 第31-33页 |
| 2.6 克隆胚胎的滋养层和胎盘缺陷 | 第33-34页 |
| 2.7 本研究的目的意义 | 第34-36页 |
| 试验研究 | 第36-118页 |
| 第三章 牦牛体外受精、体细胞核移植培养体系优化 | 第36-53页 |
| 3.1 材料与方法 | 第36-41页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第36-37页 |
| 3.1.2 试验试剂及仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.2.1 试验试剂 | 第37页 |
| 3.1.2.2 主要仪器 | 第37-38页 |
| 3.1.3 试验方法 | 第38-41页 |
| 3.1.3.1 牦牛卵母细胞体外成熟 | 第38页 |
| 3.1.3.2 体外受精及胚胎培养 | 第38-39页 |
| 3.1.3.3 供体细胞培养 | 第39页 |
| 3.1.3.4 体细胞核移植 | 第39页 |
| 3.1.3.5 试验设计 | 第39-41页 |
| 3.1.4 数据统计分析 | 第41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.2.1 成熟时间和COCs分级对牦牛卵母细胞体外发育的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.2 精子分离方法和精子浓度对牦牛COCs体外受精的影响 | 第42-43页 |
| 3.2.3 不同体外培养体系对牦牛体外受精胚胎的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.4 供体细胞传代次数对重构胚的影响 | 第44-45页 |
| 3.2.5 供体细胞血清饥饿时间对重构胚的影响 | 第45-46页 |
| 3.2.6 脉冲电压对重构胚融合率的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.7 6-DMAP处理时间对重构胚发育的影响 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-52页 |
| 3.3.1 牦牛卵母细胞体外受精及胚胎培养 | 第47-50页 |
| 3.3.2 牦牛体细胞核移植 | 第50-52页 |
| 3.4 小结 | 第52-53页 |
| 第四章 利用RNA-seq技术挖掘牦牛体外受精和体细胞核移植囊胚的差异表达基因 | 第53-79页 |
| 4.1 材料与方法 | 第53-61页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第53页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 | 第53-54页 |
| 4.1.2.1 试验试剂 | 第53-54页 |
| 4.1.2.2 主要仪器 | 第54页 |
| 4.1.3 试验方法 | 第54-61页 |
| 4.1.3.1 总RNA提取及质量检测 | 第54-55页 |
| 4.1.3.2 cDNA扩增及产物质控 | 第55-56页 |
| 4.1.3.3 cDNA文库构建和测序 | 第56-57页 |
| 4.1.3.4 测序数据预处理 | 第57页 |
| 4.1.3.5 参考序列比对分析 | 第57页 |
| 4.1.3.6 基因表达水平分析 | 第57-58页 |
| 4.1.3.7 GO富集及KEGG通路分析 | 第58页 |
| 4.1.3.8 qPCR验证差异表达基因 | 第58-61页 |
| 4.1.4 数据统计分析 | 第61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-72页 |
| 4.2.1 扩增检测结果 | 第61-62页 |
| 4.2.2 测序数据概况 | 第62-64页 |
| 4.2.3 与参考基因组比对情况统计 | 第64-65页 |
| 4.2.4 差异表达基因筛选 | 第65-67页 |
| 4.2.5 差异表达基因功能富集 | 第67-70页 |
| 4.2.6 差异表达基因的qPCR验证 | 第70-71页 |
| 4.2.7 新转录预测 | 第71-72页 |
| 4.3 讨论 | 第72-77页 |
| 4.4 小结 | 第77-79页 |
| 第五章 组蛋白甲基转移酶抑制剂对牦牛体细胞核移植重编程的影响 | 第79-102页 |
| 5.1 材料与方法 | 第80-85页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第80页 |
| 5.1.2 试验试剂及仪器 | 第80页 |
| 5.1.2.1 试验试剂 | 第80页 |
| 5.1.2.2 主要仪器 | 第80页 |
| 5.1.3 试验方法 | 第80-84页 |
| 5.1.3.1 GSK126配制 | 第80-81页 |
| 5.1.3.2 牦牛成纤维细胞培养 | 第81页 |
| 5.1.3.3 牦牛体外受精及体细胞核移植 | 第81页 |
| 5.1.3.4 细胞活力测定 | 第81页 |
| 5.1.3.5 细胞周期测定 | 第81页 |
| 5.1.3.6 细胞凋亡检测 | 第81-82页 |
| 5.1.3.7 胚胎免疫荧光染色 | 第82页 |
| 5.1.3.8 胚胎细胞凋亡检测 | 第82页 |
| 5.1.3.9 实时定量PCR | 第82-83页 |
| 5.1.3.10 试验设计 | 第83-84页 |
| 5.1.4 数据统计分析 | 第84-85页 |
| 5.2 结果与分析 | 第85-97页 |
| 5.2.1 GSK126处理对牦牛成纤维细胞形态的影响 | 第85页 |
| 5.2.2 不同浓度GSK126处理对细胞活力的影响 | 第85-86页 |
| 5.2.3 GSK126处理后对细胞周期的影响 | 第86-87页 |
| 5.2.4 GSK126处理后细胞凋亡分析 | 第87-88页 |
| 5.2.5 GSK126处理牦牛成纤维细胞对SCNT的影响 | 第88-91页 |
| 5.2.6 GSK126处理供体细胞对核移植重构胚囊胚凋亡的影响 | 第91-92页 |
| 5.2.7 GSK126对SCNT胚胎表观修饰的影响 | 第92-95页 |
| 5.2.8 GSK126对SCNT胚胎凋亡和发育相关基因表达的影响 | 第95-97页 |
| 5.3 讨论 | 第97-100页 |
| 5.4 小结 | 第100-102页 |
| 第六章 氟化钠对牛早期胚胎发育和凋亡的影响 | 第102-115页 |
| 6.1 材料与方法 | 第102-107页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第102-103页 |
| 6.1.2 试验试剂及仪器 | 第103页 |
| 6.1.2.1 试验试剂 | 第103页 |
| 6.1.2.2 主要仪器 | 第103页 |
| 6.1.3 试验方法 | 第103-106页 |
| 6.1.3.1 卵母细胞培养、氟化钠处理及体外受精 | 第103页 |
| 6.1.3.2 ROS测定 | 第103页 |
| 6.1.3.3 抗氧化能力测定 | 第103-104页 |
| 6.1.3.4 Caspase-3、Caspase-9 活性检测 | 第104-105页 |
| 6.1.3.5 实时定量PCR | 第105页 |
| 6.1.3.6 胚胎免疫荧光染色 | 第105页 |
| 6.1.3.7 胚胎细胞凋亡检测 | 第105-106页 |
| 6.1.3.8 Immunoblotting | 第106页 |
| 6.1.3.9 试验设计 | 第106页 |
| 6.1.4 数据统计分析 | 第106-107页 |
| 6.2 结果与分析 | 第107-112页 |
| 6.2.1 不同浓度氟化钠对卵母细胞及胚胎发育的影响 | 第107-108页 |
| 6.2.2 NaF对卵母细胞内ROS、T-AOC、GSH、GSH-Px和CAT的影响 | 第108-109页 |
| 6.2.3 氟化钠处理后对卵母细胞凋亡的影响 | 第109-110页 |
| 6.2.4 氟化钠处理后对囊胚发育的影响 | 第110-112页 |
| 6.3 讨论 | 第112-113页 |
| 6.4 小结 | 第113-115页 |
| 第七章 结论与展望 | 第115-118页 |
| 7.1 研究结论 | 第115-116页 |
| 7.2 创新点 | 第116页 |
| 7.3 研究的不足及展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-136页 |
| 附录 | 第136-150页 |
| 缩略词表 | 第150-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 个人简介 | 第153-154页 |
| 攻读博士学位期间参与的科研项目及发表论文 | 第154-155页 |
| 导师简介 | 第155-156页 |
