| 名词缩写 | 第3-4页 |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第一章 绪论 | 第9-18页 |
| 1.1 微生物次级代谢合成基因簇克隆 | 第9-11页 |
| 1.2 阿霉素 | 第11-13页 |
| 1.2.1 阿霉素前体柔红霉素简介 | 第11-12页 |
| 1.2.2 阿霉素简介 | 第12-13页 |
| 1.2.3 阿霉素作用机制简介 | 第13页 |
| 1.3 阿霉素工业生产方法 | 第13-14页 |
| 1.4 阿霉素生物合成途径 | 第14-15页 |
| 1.5 重组工程概述 | 第15-16页 |
| 1.6 苜蓿中华根瘤菌简介 | 第16-17页 |
| 1.7 根瘤菌固氮简介 | 第17-18页 |
| 第二章 阿霉素生物合成基因簇大片段克隆第一部分的克隆 | 第18-35页 |
| 第一节 阿霉素生物合成基因簇第一部分第二个大片段10.0kb克隆的补充 | 第18-28页 |
| 2.1 实验材料 | 第19-21页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第19-20页 |
| 2.1.2 DNA测序 | 第20页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 培养基及溶液配制 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 DNA酶切反应 | 第21页 |
| 2.2.2 目的片段DNA胶回收 | 第21页 |
| 2.2.3 DNA片段连接反应 | 第21-22页 |
| 2.2.4 PCR扩增目的基因片段 | 第22页 |
| 2.2.5 E.coli DH10B电转化感受态的制备以及DNA的电转化 | 第22-23页 |
| 2.2.6 E.coli GM119化转感受态细胞制备及DNA的化转 | 第23页 |
| 2.2.7 pDS07和pDS14-Z的去甲基化 | 第23页 |
| 2.2.8 pDS18和pDS19的构建 | 第23-24页 |
| 2.3 实验结果 | 第24-28页 |
| 2.3.1 去除pDS07和pDS14-Z甲基化验证 | 第24-25页 |
| 2.3.2 阿霉素生物合成基因簾从NsiⅠ(2977)到NsiⅠ(12975)10.0kb的拼接结果 | 第25-28页 |
| 第二节 阿霉素生物合成基因簇第一部分中第三个大片段11.7kb克隆的补充 | 第28-35页 |
| 2.4 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.4.1 引物表和质粒表 | 第28-29页 |
| 2.5 实验方法 | 第29页 |
| 2.6 实验结果及讨论 | 第29-35页 |
| 2.6.1 阿霉素生物合成基因簇从NsiⅠ(12975)到AvrⅡ(24633)11.6 kb的拼接结果 | 第29-34页 |
| 2.6.2 实验讨论 | 第34-35页 |
| 第三章 阿霉素生物合成基因簇大片段克隆第二部分克隆 | 第35-46页 |
| 第一节 阿霉素生物合成基因簇第二部分第一个大片段7.8kb的克隆 | 第35-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第35-36页 |
| 3.1.1 引物表和质粒表 | 第35-36页 |
| 3.2 实验方法 | 第36页 |
| 3.3 实验结果 | 第36-40页 |
| 3.3.1 阿霉素生物合成基因簇从AvrⅡ(24633)到StuI(32443)7.8kb的拼接结果 | 第36-40页 |
| 第二节 阿霉素生物合成基因簇第二部分第二个大片段8.9kb克隆 | 第40-46页 |
| 3.4 实验材料 | 第40-41页 |
| 3.4.1 引物表和质粒表 | 第40-41页 |
| 3.5 实验方法 | 第41页 |
| 3.6 实验结果及讨论 | 第41-46页 |
| 3.6.1 阿霉素生物合成基因簇从EcoRⅠ(23297)到HindⅢ(38652)8.9kb的拼接结果 | 第41-45页 |
| 3.6.2 实验讨论 | 第45-46页 |
| 第四章 重组工程法敲除苜蓿中华根瘤菌S.meliloti Rm1021的基因 | 第46-53页 |
| 第一节 单质粒系统中含lacIq和ter片段的重组克隆构建 | 第46-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第46-47页 |
| 4.1.1 引物表和质粒表 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47页 |
| 4.3 实验结果 | 第47-50页 |
| 4.3.1 含redαβ组酶基因质粒的构建 | 第47-50页 |
| 第二节 重组工程法敲除苜蓿中华根瘤菌S.meliloti Rm1021的基因 | 第50-53页 |
| 4.4 实验材料 | 第50-51页 |
| 4.5 实验方法 | 第51页 |
| 4.6 重组工程介导的S.meliloti Rm1021基因敲除原理 | 第51-52页 |
| 4.7 实验结果和讨论 | 第52-53页 |
| 4.7.1 Redαβ重组系统对S.meliloti Rm1021基因敲除 | 第52页 |
| 4.7.2 实验讨论 | 第52-53页 |
| 总结 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
