| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩略词 | 第6-12页 |
| 第一章 绪论 | 第12-32页 |
| 1.1 肿瘤多药耐药（MDR） | 第12-15页 |
| 1.1.1 MDR的产生机制 | 第12-14页 |
| 1.1.2 MDR的逆转方法 | 第14-15页 |
| 1.2 miRNA | 第15-17页 |
| 1.2.1 miRNA的生物起源 | 第15-16页 |
| 1.2.2 miRNA与靶基因的作用 | 第16-17页 |
| 1.2.3 miRNA与MDR的关系 | 第17页 |
| 1.3 DNA甲基化 | 第17-19页 |
| 1.3.1 甲基化可调控miRNA的表达 | 第18页 |
| 1.3.2 DNA甲基化与癌症 | 第18-19页 |
| 1.4 瞬时受体电位离子通道 | 第19-24页 |
| 1.4.1 TRP通道家族成员 | 第20-22页 |
| 1.4.2 TRPC5的简介 | 第22页 |
| 1.4.3 TRPC5与肿瘤多药的关系 | 第22-24页 |
| 1.5 硫酸乙酰肝素糖蛋白 | 第24-27页 |
| 1.5.1 HSPGs参与的细胞活动 | 第24-25页 |
| 1.5.2 硫酸乙酰肝素链的结构与组装 | 第25-26页 |
| 1.5.3 硫酸乙酰肝素链中NDST1的作用 | 第26-27页 |
| 1.6 本论文的主要研究内容 | 第27-32页 |
| 1.6.1 研究意义 | 第27页 |
| 1.6.2 研究目标 | 第27页 |
| 1.6.3 研究内容 | 第27-32页 |
| 第二章 miR-149 和miR-320a介导肿瘤化疗耐药 | 第32-40页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-34页 |
| 2.2.1 细胞株 | 第32页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第32-33页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第33-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-36页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第34页 |
| 2.3.2 化学修饰过的miRNA模拟物的转染 | 第34页 |
| 2.3.3 药物半抑制浓度IC50检测 | 第34页 |
| 2.3.4 miRNA提取 | 第34-35页 |
| 2.3.5 miRNA和U6 snRNA反转录 | 第35页 |
| 2.3.6 实时荧光定量PCR检测细胞中miRNA的表达量 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果 | 第36-38页 |
| 2.4.1 miR-149 和miR-320a在乳腺癌细胞中的表达 | 第36-37页 |
| 2.4.2 miR-149 和miR-320a对MCF-7/ADM细胞的耐药性的影响 | 第37页 |
| 2.4.3 miR-149 和miR-320a在其他肿瘤细胞内的表达 | 第37-38页 |
| 2.4.4 miR-149 和miR-320a对其他肿瘤耐药细胞的耐药性的影响 | 第38页 |
| 2.5 讨论 | 第38-39页 |
| 2.6 本章小结 | 第39-40页 |
| 第三章 miR-149 和miR-320a在乳腺癌耐药细胞中异常表达的机制 | 第40-63页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 细胞株 | 第40页 |
| 3.2.2 菌株及质粒 | 第40页 |
| 3.2.3 实验试剂 | 第40-41页 |
| 3.2.4 实验仪器 | 第41-42页 |
| 3.2.5 引物 | 第42页 |
| 3.3 实验方法 | 第42-48页 |
| 3.3.1 RNA提取 | 第42-43页 |
| 3.3.2 cDNA 5’末端快速扩增技术（5’-Rapid Amplification of cDNA Ends ，5’RACE） | 第43页 |
| 3.3.3 质粒转化 | 第43页 |
| 3.3.4 质粒提取 | 第43-44页 |
| 3.3.5 胶回收 | 第44页 |
| 3.3.6 启动子活性测试 | 第44页 |
| 3.3.7 细胞转染 | 第44页 |
| 3.3.8 双荧光素酶报告实验 | 第44页 |
| 3.3.9 亚硫酸氢盐处理后测序（bisulfite sequencing PCR，BSP） | 第44-45页 |
| 3.3.10 甲基化处理 | 第45页 |
| 3.3.11 染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation ,Ch IP) | 第45-46页 |
| 3.3.12 免疫荧光染色 | 第46页 |
| 3.3.13 蛋白制备 | 第46-47页 |
| 3.3.14 蛋白浓度测定 | 第47页 |
| 3.3.15 蛋白印迹 | 第47-48页 |
| 3.4 实验结果 | 第48-61页 |
| 3.4.1 miR-149 受非独立的启动子调控 | 第48-49页 |
| 3.4.2 miR-149 与GPC1共用一个启动子 | 第49-51页 |
| 3.4.3 miR-149 的下调与 5’-UTR的甲基化有关 | 第51-53页 |
| 3.4.4 miR-149 的去甲基化影响GPC1的表达 | 第53-54页 |
| 3.4.5 miR-320a受独立的启动子调控 | 第54-56页 |
| 3.4.6 miR-320a的下调与启动子区的甲基化有关 | 第56-58页 |
| 3.4.7 miR-320a的下调与耐药细胞中ETS-1 的甲基化有关 | 第58-61页 |
| 3.5 讨论 | 第61-62页 |
| 3.6 本章小结 | 第62-63页 |
| 第四章 miR-149 和miR-320a及其靶向蛋白在乳腺癌肿瘤细胞上的的研究 | 第63-78页 |
| 4.1 前言 | 第63页 |
| 4.2 实验材料 | 第63-64页 |
| 4.2.1 菌株及质粒 | 第63页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第63-64页 |
| 4.2.3 实验仪器 | 第64页 |
| 4.2.4 引物 | 第64页 |
| 4.3 实验方法 | 第64-66页 |
| 4.3.1 靶基因确认 | 第64-65页 |
| 4.3.2 流式细胞仪检测蛋白含量 | 第65页 |
| 4.3.3 双荧光酶报告实验 | 第65页 |
| 4.3.4 实时荧光定量PCR | 第65-66页 |
| 4.3.5 免疫印迹 | 第66页 |
| 4.3.6 细胞存活率检测 | 第66页 |
| 4.3.7 免疫荧光共聚焦 | 第66页 |
| 4.4 实验结果 | 第66-74页 |
| 4.4.1 miR-149 靶向作用于NDST1 | 第66-67页 |
| 4.4.2 NDST1在乳腺癌细胞中的表达 | 第67-68页 |
| 4.4.3 NDST1的表达受miR-149 的调控 | 第68页 |
| 4.4.4 NDST1的表达异常影响耐药性 | 第68-69页 |
| 4.4.5 HS链信号通路受到miR-149 的影响 | 第69-70页 |
| 4.4.6 miR-320a靶向作用于TRPC5和NFATc3 | 第70-71页 |
| 4.4.7 TRPC5和NFATc3在乳腺癌细胞中的表达 | 第71-72页 |
| 4.4.8 TRPC5和NFATc3在其他肿瘤细胞中的表达 | 第72页 |
| 4.4.9 TRPC5和NFATc3的表达受miR-320a的调控 | 第72-73页 |
| 4.4.10 TRPC5和NFATc3的表达受甲基化的影响 | 第73-74页 |
| 4.4.11 miR-320a靶向作用TRPC5影响耐药性 | 第74页 |
| 4.5 讨论 | 第74-77页 |
| 4.6 本章小结 | 第77-78页 |
| 第五章 miR-149 和miR-320a及其靶向蛋白在乳腺癌临床标本上的研究 | 第78-87页 |
| 5.1 前言 | 第78页 |
| 5.2 实验材料 | 第78-79页 |
| 5.2.1 实验试剂 | 第78-79页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第79页 |
| 5.3 实验方法 | 第79-81页 |
| 5.3.1 病人样本收集 | 第79页 |
| 5.3.2 病人样本处理 | 第79-80页 |
| 5.3.3 免疫组化 | 第80页 |
| 5.3.4 免疫荧光原位杂交技术（fluorescence in situ hybridization,FISH） | 第80-81页 |
| 5.3.5 免疫荧光共聚焦 | 第81页 |
| 5.4 实验结果 | 第81-86页 |
| 5.4.1 miR-149 和miR-320a在临床肿瘤标本中的表达 | 第81-82页 |
| 5.4.2 NDST1在临床肿瘤标本中的表达 | 第82-83页 |
| 5.4.3 TRPC5在临床肿瘤标本中的表达 | 第83页 |
| 5.4.4 NFATc3在临床肿瘤标本中的表达 | 第83页 |
| 5.4.5 ETS-1 在临床肿瘤标本中的表达 | 第83-84页 |
| 5.4.6 NDST1的表达与DFRS之间的关系 | 第84页 |
| 5.4.7 miR-320a的表达与DFRS之间的关系 | 第84-86页 |
| 5.5 讨论 | 第86页 |
| 5.6 本章小结 | 第86-87页 |
| 主要结论与展望 | 第87-89页 |
| 主要结论 | 第87页 |
| 展望 | 第87-89页 |
| 论文特色和创新点 | 第89-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 参考文献 | 第91-101页 |
| 附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文 | 第101页 |
