| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英汉缩略语名词对照 | 第12-17页 |
| 1 引言 | 第17-22页 |
| 2 第一部分 通过生物信息学研究miR-186-5p与肾透明细胞癌侵袭的关系 | 第22-28页 |
| 2.1 实验方法 | 第23-24页 |
| 2.1.1 GEO DataSets微阵列芯片数据分析 | 第23页 |
| 2.1.2 TCGA数据库数据分析 | 第23页 |
| 2.1.3 统计学方法 | 第23-24页 |
| 2.2 实验结果 | 第24-27页 |
| 2.2.1 miR-186-5p在转移性肾透明细胞癌中低表达 | 第24-25页 |
| 2.2.2 肾透明细胞癌患者肾癌组织中miR-186-5p的表达量与总生存率呈正相关 | 第25页 |
| 2.2.3 肾透明细胞癌患者肾癌组织中miR-186-5p的表达量与无复发生存率呈正相关 | 第25-27页 |
| 2.3 小结 | 第27-28页 |
| 3 第二部分 细胞水平研究miR-186-5p与肾透明细胞癌侵袭能力的关系 | 第28-74页 |
| 3.1 材料和仪器 | 第29-35页 |
| 3.1.1 细胞系 | 第29页 |
| 3.1.2 质粒,miR-186-5p慢病毒表达载体,miR-186-5p inhibitor,shCDC | 第29页 |
| 3.1.3 主要试剂和试剂盒 | 第29-31页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第31-32页 |
| 3.1.5 主要实验试剂的配置(自备) | 第32-35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-45页 |
| 3.2.1 细胞培养 | 第35页 |
| 3.2.2 细胞复苏 | 第35页 |
| 3.2.3 细胞传代 | 第35页 |
| 3.2.4 细胞冻存 | 第35-36页 |
| 3.2.5 切胶回收目的片段 | 第36页 |
| 3.2.6 感受态大肠杆菌转化 | 第36-37页 |
| 3.2.7 质粒提取 | 第37-38页 |
| 3.2.8 质粒转染 | 第38-39页 |
| 3.2.9 miR-186-5p过表达慢病毒(Lentivirus)载体的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.10 CDC42敲低慢病毒(Lentivirus)载体的构建 | 第40页 |
| 3.2.11 慢病毒的制备 | 第40-41页 |
| 3.2.12 慢病毒感染 | 第41页 |
| 3.2.13 胞总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 3.2.14 细胞蛋白提取 | 第42页 |
| 3.2.15 蛋白质免疫印迹(Western blot) | 第42-43页 |
| 3.2.16 细胞侵袭实验(Transwell小室侵袭实验) | 第43-44页 |
| 3.2.17 双荧光素酶报告基因实验(Dual-Luciferase Reporter Assay) | 第44页 |
| 3.2.18 统计学方法 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果 | 第45-73页 |
| 3.3.1 三种不同人类肾透明细胞癌细胞系中miR-185-5p的相对表达量 | 第45页 |
| 3.3.2 miR-186-5p抑制的ACHN细胞系和miR-186-5p过表达的OSRC-2细胞系、SW839细胞系的鉴定 | 第45-48页 |
| 3.3.3 miR-186-5p表达抑制对肾透明癌细胞系ACHN侵袭能力的影响 | 第48页 |
| 3.3.4 miR-186-5p过表达对肾透明癌细胞系OSRC-2和SW839侵袭能力的影响 | 第48-50页 |
| 3.3.5 多个生物信息预测网站预测CDC42可能是miR-186-5p的一个直接靶点 | 第50-51页 |
| 3.3.6 miR-186-5p表达抑制对CDC42 mRNA和蛋白表达量的影响 | 第51-53页 |
| 3.3.7 miR-186-5p过表达对CDC42 mRNA和蛋白表达量的影响 | 第53-56页 |
| 3.3.8 CDC42是miR-186-5p的直接靶点 | 第56-64页 |
| 3.3.9 CDC42介导miR-186-5p抑制肾透明细胞癌侵袭转移的作用 | 第64-73页 |
| 3.4 小结 | 第73-74页 |
| 4 第三部分 细胞水平研究miR-186-5p与肾透明细胞癌血管形成的关系 | 第74-94页 |
| 4.1 材料和仪器 | 第75页 |
| 4.2 实验方法 | 第75-79页 |
| 4.2.1 细胞培养 | 第75页 |
| 4.2.2 HUVEC细胞血管生成实验 | 第75页 |
| 4.2.3 细胞共培养 | 第75-76页 |
| 4.2.4 RNA提取 | 第76页 |
| 4.2.5 蛋白免疫印迹 | 第76-77页 |
| 4.2.6 双荧光素酶报告基因实验(Dual-Luciferase Reporter Assay) | 第77-78页 |
| 4.2.7 统计学方法 | 第78-79页 |
| 4.3 实验结果 | 第79-93页 |
| 4.3.1 在肾透明癌细胞系ACHN抑制miR-186-5p表达对HUVEC细胞血管形成能力的影响 | 第79-80页 |
| 4.3.2 在肾透明癌细胞系OSRC-2和SW839过表达miR-186-5p对HUVEC细胞血管形成能力的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.3 多个生物信息预测网站预测VEGFA可能是miR-186-5p的一个直接靶点 | 第81-82页 |
| 4.3.4 miR-186-5p表达抑制对VEGFAmRNA和蛋白表达量的影响 | 第82-83页 |
| 4.3.5 miR-186-5p过表达对VEGFAmRNA和蛋白表达量的影响 | 第83-86页 |
| 4.3.6 VEGFA是miR-186-5p的直接靶点 | 第86-91页 |
| 4.3.7 VEGFA介导miR-186-5p抑制肾透明细胞癌血管形成的作用 | 第91-93页 |
| 4.4 小结 | 第93-94页 |
| 5 讨论 | 第94-100页 |
| 6 结论和展望 | 第100-101页 |
| 参考文献 | 第101-112页 |
| 综述 MicroRNA在肾细胞癌中的研究进展 | 第112-139页 |
| 参考文献 | 第126-139页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第139页 |
