| Abbreviations | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 引言 | 第12-18页 |
| Abl的结构与功能 | 第12-13页 |
| ABL激酶的共价修饰 | 第13页 |
| Cdc25结构与功能 | 第13-14页 |
| Cdc25与癌症的发生 | 第14-15页 |
| Cdc25C的共价修饰 | 第15页 |
| DNA Damage | 第15-16页 |
| c-Abl与DNA Damage | 第16页 |
| Cdc25C与DNA Damage | 第16-17页 |
| 本课题研究的立题依据及拟解决的科学问题 | 第17-18页 |
| 材料与方法 | 第18-24页 |
| 1 细胞株、菌株、病毒株和质粒 | 第18页 |
| 2 分子生物学试剂 | 第18页 |
| 3 质粒构建、引物合成及序列测定 | 第18-19页 |
| 3.1 pRex-EGFPN1-Cdc25C相关载体的构建 | 第18-19页 |
| 3.2 Cdc25C Y165F、Y165D和Y165E突变体表达质粒的构建 | 第19页 |
| 4 细胞培养、冻存及转染 | 第19-20页 |
| 5 免疫沉淀和免疫印迹 | 第20页 |
| 7 pRex-EGFPN1-IRES-hygro载体的病毒包装 | 第20-21页 |
| 8 用CRISPR/Cas9系统构建HeLa细胞Cdc25C基因敲除稳定细胞株 | 第21-22页 |
| 8.1 sgRNA的设计 | 第21页 |
| 8.2 重组真核表达质粒pSpCas9-Cdc25C的构建 | 第21页 |
| 8.3 Cdc25C基因敲除稳定细胞株的筛选 | 第21页 |
| 8.4 提取细胞基因组DNA并对目标片段进行测序 | 第21页 |
| 8.5 稳定细胞株的免疫印迹检测 | 第21-22页 |
| 9 构建HeLa细胞稳定表达GFP-Cdc25C的细胞株 | 第22页 |
| 9.1 敲除内源性Cdc25C的基因 | 第22页 |
| 9.2 用病毒感染法将GFP-Cdc25C导入HeLa细胞 | 第22页 |
| 10 Cdc25C体外磷酸酶活性分析 | 第22-23页 |
| 11 细胞免疫荧光试验 | 第23页 |
| 12 流式细胞仪检测细胞周期 | 第23页 |
| 13 统计学分析 | 第23-24页 |
| 实验结果 | 第24-38页 |
| c-Abl可促进 1433 与Cdc25C的结合 | 第24-26页 |
| c-Abl抑制Cdc25C磷酸酶活性 | 第26-27页 |
| c-Abl介导的Cdc25C磷酸化在细胞周期调控中的作用 | 第27-32页 |
| 3.1 构建Cdc25C基因敲除稳定细胞系 | 第27-28页 |
| 3.2 在Cdc25C敲除的基础上构建GFP-Cdc25C-WT/Y165F稳定细胞株 | 第28-31页 |
| 3.3 c-Abl通过Cdc25C Y165位点磷酸化调节G2/M期转换 | 第31-32页 |
| 电离辐射条件下c-Abl通过Cdc25C磷酸化介导G2/M期阻滞 | 第32-34页 |
| 表达磷酸化缺陷Cdc25C Y165F突变体可导致多倍体细胞形成 | 第34-36页 |
| 表达磷酸化缺陷Cdc25C Y165F突变体抗凋亡活性提高 | 第36-38页 |
| 讨论 | 第38-42页 |
| 总结 | 第42-43页 |
| 附件 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 个人简历 | 第49-50页 |
| 致谢 | 第50页 |
