| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 引言 | 第14-24页 |
| 1.牙鲆概述 | 第14-16页 |
| 2.SRF研究概况 | 第16-19页 |
| 3.Micro RNA研究概述 | 第19-23页 |
| 4.研究目的与意义 | 第23-24页 |
| 第一章 牙鲆SRF基因的克隆及表达 | 第24-52页 |
| ·实验材料与试剂 | 第24-28页 |
| ·实验用鱼和样品采集 | 第24-25页 |
| ·实验主要试剂 | 第25-26页 |
| ·常用试剂的配置 | 第26-28页 |
| ·实验主要仪器设备 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-42页 |
| ·总RNA的提取与鉴定 | 第28-29页 |
| ·cDNA链的合成 | 第29-30页 |
| ·引物设计 | 第30页 |
| ·牙鲆SRF基因片段克隆 | 第30-33页 |
| ·RAC E (Rapid Amplification c DNA Ends)实验 | 第33-38页 |
| ·牙鲆SRF基因序列分析 | 第38-39页 |
| ·荧光定量PCR | 第39-40页 |
| ·Western blot实验 | 第40-42页 |
| ·实验结果 | 第42-50页 |
| ·牙鲆SRF cDNA克隆及分析 | 第42-46页 |
| ·SRF基因在牙鲆发育中的表达 | 第46-50页 |
| ·讨论 | 第50-52页 |
| 第二章Pol-mir-133a靶基因预测及验证 | 第52-65页 |
| ·实验材料与试剂 | 第52-53页 |
| ·实验材料 | 第52页 |
| ·实验试剂 | 第52-53页 |
| ·实验仪器 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-60页 |
| ·生物信息学预测miR-133 靶基因 | 第53-54页 |
| ·候选靶基因 3’UTR引物的设计 | 第54页 |
| ·靶基因载体的构建 | 第54-58页 |
| ·靶基因验证 | 第58-60页 |
| ·结果 | 第60-62页 |
| ·靶基因载体的构建 | 第60-61页 |
| ·靶基因验证 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第三章 牙鲆SRF基因真核表达载体的构建以及鉴定 | 第65-77页 |
| ·实验材料与试剂 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-69页 |
| ·总RNA的提取及c DNA的合成 | 第65页 |
| ·引物设计及合成 | 第65-66页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第66-68页 |
| ·真核表达载体转染细胞 | 第68页 |
| ·RT-PCR检测细胞转染前后SRF mRNA的表达 | 第68-69页 |
| ·Western blot检测细胞转染前后的表达 | 第69页 |
| ·牙鲆MRFs基因启动子序列的分析 | 第69页 |
| ·RT-PCR检测细胞转染前后MRFs的表达 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-74页 |
| ·真核表达载体的构建 | 第69-70页 |
| ·重组质粒在牙鲆胚胎细胞中的表达 | 第70-71页 |
| ·实时定量PCR检测转染牙鲆胚胎细胞SRF mRNA表达 | 第71页 |
| ·Western blot检测转染细胞SRF蛋白表达水平 | 第71-72页 |
| ·牙鲆MRFs基因启动子序列的分析 | 第72-74页 |
| ·RT-PCR检测细胞转染前后MRFs的表达 | 第74页 |
| ·讨论 | 第74-77页 |
| 小结 | 第77-78页 |
| 参考文献 | 第78-83页 |
| 发表论文 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
