| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 引言 | 第16-19页 |
| 1 研究内容和技术路线 | 第19-22页 |
| ·研究内容 | 第19-21页 |
| ·建立多种样本lnc RNA提取与定量分析方法 | 第19页 |
| ·组织RMRP表达水平检测 | 第19页 |
| ·血浆RMRP水平检测 | 第19页 |
| ·胃液RMRP水平检测 | 第19-20页 |
| ·系统分析体液中RMRP来源，明确体液RMRP生物学特性 | 第20页 |
| ·细胞转染与转染效率 | 第20页 |
| ·沉默和上调RMRP水平对胃癌细胞生长的影响 | 第20页 |
| ·建立裸鼠移植瘤动物模型，体内验证RMRP对胃癌细胞生长的影响 | 第20页 |
| ·分析RMRP影响细胞周期的分子机制 | 第20页 |
| ·其它lnc RNA与胃癌关系的研究 | 第20-21页 |
| ·技术路线 | 第21-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-35页 |
| ·材料 | 第22-24页 |
| ·主要仪器 | 第22-23页 |
| ·主要试剂 | 第23-24页 |
| ·实验标本 | 第24页 |
| ·细胞株 | 第24页 |
| ·实验动物 | 第24页 |
| ·伦理批准及受试者知情权 | 第24页 |
| ·方法 | 第24-35页 |
| ·样本的采集与保存 | 第24-25页 |
| ·样本总RNA提取 | 第25-26页 |
| ·总RNA的定量与完整性检测 | 第26页 |
| ·q RT-PCR检测 | 第26-29页 |
| ·细胞培养 | 第29-30页 |
| ·pc DNA3.1-RMRP表达质粒的构建与扩增 | 第30-32页 |
| ·RMRP靶向si RNA设计与化学合成 | 第32页 |
| ·RTCA检测细胞增殖 | 第32页 |
| ·流式细胞术 | 第32-33页 |
| ·细胞平板克隆形成试验 | 第33页 |
| ·动物实验 | 第33-34页 |
| ·血浆RMRP来源与稳定性实验 | 第34页 |
| ·统计分析 | 第34-35页 |
| 3 实验结果 | 第35-74页 |
| ·多种样本RNA提取与定量分析方法的建立 | 第35-39页 |
| ·利用Trizol提取组织总RNA，改良Trizol LS法提取血浆、胃液总RNA | 第35-36页 |
| ·非变性 1 %琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性 | 第36页 |
| ·实时荧光q RT-PCR测定样本RMRP | 第36-37页 |
| ·q RT-PCR产物进行克隆后测序证实样本RMRP存在性 | 第37页 |
| ·确认血浆和胃液GAPDH水平恒定，是RT-PCR检测lnc RNA的理想参照物 | 第37-39页 |
| ·q RT-PCR技术检测组织RMRP表达水平 | 第39-44页 |
| ·分析胃癌组织和配对癌旁组织RMRP表达水平的差异 | 第39-40页 |
| ·分析胃癌组织RMRP表达水平与患者临床病理因素之间的潜在关系 | 第40-42页 |
| ·分析胃黏膜异型增生组织和配对正常组织RMRP表达水平的差异 | 第42-43页 |
| ·横向比较正常胃黏膜组织、良性病变（胃溃疡、胃炎）、癌前病变（异型增生）、胃癌组织中RMRP表达情况 | 第43-44页 |
| ·q RT-PCR技术检测血浆RMRP水平 | 第44-50页 |
| ·分析胃癌患者术前、术后2周血浆RMRP水平差异 | 第44页 |
| ·分析胃癌患者术前血浆RMRP水平与临床病理因素之间的潜在关系 | 第44-46页 |
| ·分析胃癌患者术后血浆RMRP变化程度与临床病理因素之间的潜在关系 | 第46-48页 |
| ·横向比较健康人、胃癌术前患者、胃癌术后2周患者血浆RMRP水平 | 第48页 |
| ·构建ROC曲线确定血浆RMRP作为胃癌筛查标志物的灵敏度与特异度 | 第48-50页 |
| ·q RT-PCR技术检测胃液RMRP水平 | 第50-54页 |
| ·分析正常或轻度胃炎、胃溃疡、慢性萎缩性胃炎和胃癌患者胃液RMRP水平差异 | 第50页 |
| ·分析胃癌患者胃液RMRP水平与临床病理因素之间的潜在关系 | 第50-52页 |
| ·构建ROC曲线确定胃液RMRP作为胃癌筛查标志物的灵敏度与特异度 | 第52-53页 |
| ·比较胃液RMRP、CEA和血清CEA在早期胃癌和进展期胃癌中的阳性检出率 | 第53-54页 |
| ·系统分析体液RMRP来源，明确体液RMRP生物学特性 | 第54-56页 |
| ·细胞上清试验初步探究RMRP的来源 | 第54-55页 |
| ·血浆反复冻融试验探究体液RMRP稳定性 | 第55页 |
| ·血浆不同放置时间和温度试验探究体液RMRP稳定性 | 第55-56页 |
| ·构建裸鼠胃癌移植瘤动物模型，验证血浆RMRP水平变化 | 第56页 |
| ·细胞转染与转染效率 | 第56-61页 |
| ·构建pc DNA3.1-RMRP表达质粒，合成RMRP靶向si RNA | 第56-57页 |
| ·梯度转染，确认pc DNA3.1-RMRP表达质粒和靶向si RNA最佳转染浓度 | 第57-58页 |
| ·验证pc DNA3.1-RMRP表达质粒和靶向si RNA转染效率 | 第58-61页 |
| ·沉默和上调RMRP表达对胃癌细胞生长的影响 | 第61-69页 |
| ·沉默和上调胃癌细胞RMRP表达后，实时细胞分析仪检测细胞增殖变化 | 第61-63页 |
| ·沉默和上调胃癌细胞RMRP表达后，流式细胞仪检测细胞凋亡的变化 | 第63-66页 |
| ·沉默和上调胃癌细胞RMRP表达后，流式细胞仪检测细胞周期的变化 | 第66-68页 |
| ·细胞平板克隆形成试验（plate colony formation assay） | 第68-69页 |
| ·建立裸鼠移植瘤动物模型，体内验证RMRP对胃癌细胞生长的影响 | 第69-70页 |
| ·沉默和上调胃癌细胞MGC-803的RMRP表达后，分析其对裸鼠肿瘤生长的影响 | 第69-70页 |
| ·分析裸鼠接种肿瘤后，血浆RMRP水平的变化 | 第70页 |
| ·分析RMRP影响细胞周期的分子机制 | 第70-73页 |
| ·mi Rcode软件预测RMRP下游mi RNA靶标 | 第70-71页 |
| ·构建RMRP - mi R206 Cyclin D2调控网络 | 第71页 |
| ·沉默和上调RMRP后，检测Cyclin D2表达水平变化 | 第71-73页 |
| ·其它长链非编码RNA AA174084、HMlinc RNA717与胃癌关系的研究 | 第73-74页 |
| 讨论 | 第74-79页 |
| 全文小结 | 第79-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 附录A 缩略词 | 第84-86页 |
| 附录B 综述 | 第86-103页 |
| 参考文献 | 第97-103页 |
| 附录C | 第103-104页 |
| 在学研究成果 | 第104-106页 |
| 致谢 | 第106页 |
