鸡弓形虫致密颗粒蛋白截短基因sGRA8的克隆表达及ELISA诊断方法的建立
| 摘要 | 第1-10页 |
| ABSTRACT | 第10-12页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一篇 文献综述 | 第13-31页 |
| 第一章 弓形虫与弓形虫病 | 第13-25页 |
| 1 弓形虫简介 | 第13-17页 |
| ·病原学 | 第13-15页 |
| ·生活史 | 第15-16页 |
| ·弓形虫对环境的抵抗力 | 第16-17页 |
| 2 弓形虫病的流行病学概况 | 第17-20页 |
| ·猪的弓形虫病 | 第17-18页 |
| ·羊的弓形虫病 | 第18页 |
| ·人的弓形虫病 | 第18-19页 |
| ·犬猫的弓形虫病 | 第19-20页 |
| ·鸡的弓形虫病 | 第20页 |
| 3 弓形虫病的防治 | 第20-22页 |
| ·弓形虫病的预防 | 第20-21页 |
| ·弓形虫病的治疗 | 第21-22页 |
| 参考文献 | 第22-25页 |
| 第二章 弓形虫病的实验诊断 | 第25-31页 |
| 1 病原学诊断 | 第25页 |
| ·组织学诊断 | 第25页 |
| ·动物接种或组织培养 | 第25页 |
| 2 分子学诊断 | 第25-26页 |
| ·核酸分子杂交技术 | 第25-26页 |
| ·聚合酶链反应(PCR) | 第26页 |
| ·基因芯片技术 | 第26页 |
| 3 免疫学诊断 | 第26-28页 |
| ·间接红细胞血凝试验(IHA) | 第26页 |
| ·酶免疫技术(EIA) | 第26-28页 |
| 4 ELISA抗体检测试剂盒存在的问题 | 第28-29页 |
| 参考文献 | 第29-31页 |
| 第二篇 试验研究 | 第31-67页 |
| 第三章 鸡弓形虫致密颗粒蛋白GRA8的截短表达 | 第31-49页 |
| 1 材料与方法 | 第31-40页 |
| ·材料 | 第31-33页 |
| ·实验方法 | 第33-40页 |
| 2 实验结果 | 第40-46页 |
| ·蛋白质信号肽预测 | 第40-41页 |
| ·蛋白质跨膜区、亲疏水性、抗原性预测 | 第41-43页 |
| ·截短基因的PCR扩增 | 第43页 |
| ·pMD19T-sGRA8的构建 | 第43-44页 |
| ·pCold TF-sGRA8的构建 | 第44页 |
| ·截短型重组蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| ·截短型重组蛋白在E.coli BL21中的分布 | 第45页 |
| ·截短重组蛋白的纯化 | 第45页 |
| ·截短型重组蛋白的Western blot结果 | 第45-46页 |
| 3 讨论 | 第46-48页 |
| 参考文献 | 第48-49页 |
| 第四章 sGRA8-ELISA检测方法的建立 | 第49-67页 |
| 1 实验材料 | 第49-51页 |
| ·实验动物 | 第49-50页 |
| ·虫株及其他重要血清 | 第50页 |
| ·菌种 | 第50页 |
| ·主要仪器 | 第50页 |
| ·主要试剂及耗材 | 第50-51页 |
| 2 实验方法 | 第51-54页 |
| ·虫株的复苏、扩增与纯化 | 第51页 |
| ·鸡弓形虫人工感染血清的采集 | 第51页 |
| ·sGRA8-ELISA方法的建立 | 第51-53页 |
| ·sGRA8-ELISA法的操作步骤 | 第53页 |
| ·ELISA阴、阳性判定标准的确定 | 第53页 |
| ·特异性试验 | 第53页 |
| ·重复性试验 | 第53-54页 |
| ·敏感性试验 | 第54页 |
| ·与进口试剂盒数据比较 | 第54页 |
| 3 实验结果 | 第54-64页 |
| ·sGRA8-ELISA方法建立的结果 | 第55-59页 |
| ·ELISA阴、阳性判定标准的确定 | 第59页 |
| ·特异性试验 | 第59-60页 |
| ·重复性试验 | 第60-62页 |
| ·敏感性试验 | 第62-63页 |
| ·与进口试剂盒数据比较 | 第63-64页 |
| 4 讨论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| 全文总结 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-71页 |
| 附录 | 第71-73页 |
