中国西部四省区散养肉牛BVDV流行病学调查和一株分离毒株的全基因组测序
| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 缩略词表 | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-22页 |
| 前言 | 第13页 |
| ·牛病毒性腹泻病原学 | 第13-17页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒的生物学分类 | 第13-14页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒的理化特性 | 第14页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒的基因组结构与功能 | 第14-16页 |
| ·5'-非编码区 | 第15页 |
| ·3'-非编码区 | 第15页 |
| ·BVDV大开放阅读框 | 第15-16页 |
| ·牛病毒性腹泻病毒基因组编码蛋白的结构及功能 | 第16-17页 |
| ·非结构蛋白 | 第16-17页 |
| ·结构蛋白 | 第17页 |
| ·牛病毒性腹泻病流行病学 | 第17-19页 |
| ·牛病毒性腹泻病流行特点 | 第17-18页 |
| ·牛病毒性腹泻病临床表现 | 第18页 |
| ·牛病毒性腹泻病检测方法 | 第18-19页 |
| ·牛病毒性腹泻病防控策略 | 第19-22页 |
| ·BVDV控制动力与机遇 | 第19页 |
| ·国外BVDV控制项目 | 第19-20页 |
| ·国内BVDV控制面临挑战 | 第20-22页 |
| ·自愿或强制控制 | 第20页 |
| ·相关基础设施建设 | 第20页 |
| ·检测 | 第20-21页 |
| ·防止再次引入病毒 | 第21-22页 |
| 第二章 中国西部散养肉牛BVDV流行病学调查 | 第22-27页 |
| ·引言 | 第22页 |
| ·材料 | 第22-23页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第22-23页 |
| ·主要仪器 | 第23页 |
| ·方法 | 第23-25页 |
| ·样品收集与保存 | 第23页 |
| ·BVDV抗体检测 | 第23-24页 |
| ·BVDV抗原检测 | 第24-25页 |
| ·结果 | 第25-26页 |
| ·血清抗体阳性率 | 第25页 |
| ·血清抗原阳性率 | 第25-26页 |
| ·讨论 | 第26-27页 |
| 第三章 病毒分离与基因亚型分析 | 第27-39页 |
| ·引言 | 第27页 |
| ·材料 | 第27-29页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第27-28页 |
| ·主要仪器 | 第28页 |
| ·细胞 | 第28页 |
| ·引物设计 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-33页 |
| ·病毒分离 | 第29页 |
| ·间接免疫荧光法鉴定分离毒株 | 第29页 |
| ·分离毒株RNA提取 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR | 第30-31页 |
| ·PCR产物电泳与纯化 | 第31页 |
| ·测序 | 第31页 |
| ·构建系统进化树 | 第31-33页 |
| ·结果 | 第33-37页 |
| ·分离得到毒株 | 第33-34页 |
| ·RT-PCR扩增片段 | 第34-35页 |
| ·测序结果 | 第35页 |
| ·构建系统发育树 | 第35-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 一株分离BVDV毒株的全基因组测序 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·材料 | 第39-44页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第39-40页 |
| ·仪器 | 第40页 |
| ·溶液的配制 | 第40-43页 |
| ·引物设计 | 第43页 |
| ·细胞和标准毒株 | 第43-44页 |
| ·方法 | 第44-49页 |
| ·PCR扩增 | 第44页 |
| ·PCR产物电泳与纯化 | 第44-45页 |
| ·PCR纯化产物末端加A | 第45页 |
| ·加A产物与质粒载体连接 | 第45页 |
| ·转化 | 第45-46页 |
| ·STET微量裂解法制备质粒DNA鉴定转化克隆 | 第46页 |
| ·酶切鉴定转化克隆 | 第46-47页 |
| ·酶切产物电泳分析 | 第47页 |
| ·增菌培养 | 第47页 |
| ·质粒提取 | 第47页 |
| ·测序 | 第47-48页 |
| ·细胞驯化培养 | 第48页 |
| ·间接免疫荧光试验测定NM1369病毒滴度 | 第48-49页 |
| ·结果 | 第49-52页 |
| ·不同片段PCR扩增产物电泳结果 | 第49-50页 |
| ·不同阳性克隆株酶切产物电泳结果 | 第50页 |
| ·全基因组序列分析 | 第50-51页 |
| ·NM1369株生物分型和毒价测定 | 第51-52页 |
| ·讨论 | 第52-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-54页 |
| ·实验结论 | 第53页 |
| ·创新点 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 作者简历 | 第61页 |
