PRRSV Nsp7间接ELISA检测方法的建立及其单克隆抗体的制备
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| ·猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第12页 |
| ·PRRSV 病原学 | 第12-13页 |
| ·PRRSV 分子生物学 | 第13-17页 |
| ·流行病学与临床症状 | 第17-18页 |
| ·致病机理与病理变化 | 第18页 |
| ·PRRSV 单克隆抗体研究进展 | 第18-19页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 2 材料和方法 | 第21-32页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·毒株、菌株、载体及实验动物 | 第21页 |
| ·试剂与药品 | 第21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·方法 | 第21-32页 |
| ·PRRSV Nsp7 基因的克隆 | 第21-23页 |
| ·重组质粒pMD-Nsp7 的构建 | 第23-25页 |
| ·重组质粒pET-Nsp7 的构建 | 第25页 |
| ·重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第25-27页 |
| ·间接ELISA 检测方法的建立 | 第27-28页 |
| ·单克隆抗体的制备过程 | 第28-31页 |
| ·腹水的制备过程 | 第31页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-43页 |
| ·Nsp7 基因的获得 | 第32页 |
| ·重组质粒pET-Nsp7 的鉴定 | 第32-33页 |
| ·Nsp7 的表达及纯化 | 第33页 |
| ·Nsp7 的反应原性分析 | 第33页 |
| ·抗原包被浓度与血清稀释度的优化 | 第33-35页 |
| ·Nsp7-ELISA 工作条件的优化 | 第35-36页 |
| ·临界值的确定及灵敏性、特异性分析 | 第36页 |
| ·特异性试验结果 | 第36页 |
| ·Nsp7-ELISA 敏感性和重复性结果 | 第36-38页 |
| ·临床血清样品的检测结果 | 第38-39页 |
| ·McAb 杂交瘤细胞株的建立 | 第39-40页 |
| ·单克隆抗体特性的鉴定 | 第40-43页 |
| ·单克隆抗体效价的测定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体亚类的鉴定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体 Western blot 鉴定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体 IFA 鉴定 | 第40-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
| 参考文献 | 第47-54页 |
| 附录 | 第54-61页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第61页 |
