| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-18页 |
| 1 绪论 | 第18-26页 |
| ·课题背景 | 第18-19页 |
| ·污染物溯源,保护出口维护我国国际贸易利益 | 第18页 |
| ·制定安全标准、整合监测技术,防范针对我国的新一轮技术性贸易壁垒 | 第18-19页 |
| ·开展出入境检疫风险评估,维护我国生态安全 | 第19页 |
| ·综合分析实施能够产生的重大经济、社会效益 | 第19-21页 |
| ·经济效益分析 | 第19-20页 |
| ·社会效益分析 | 第20页 |
| ·生态效益分析 | 第20-21页 |
| ·壶菌国内外相关研究现状及发展趋势 | 第21-22页 |
| ·两栖类壶菌病(Chytridiomycosis)的发现 | 第21页 |
| ·两栖类壶菌病原的来源 | 第21-22页 |
| ·两栖类壶菌病的临床症状及致死机理 | 第22页 |
| ·壶菌病流行病学 | 第22-24页 |
| ·传染源 | 第22页 |
| ·传播途径 | 第22页 |
| ·两栖类的易感性 | 第22-23页 |
| ·季节性与地域性 | 第23页 |
| ·壶菌病的诊断和防治 | 第23-24页 |
| ·LAMP的原理技术 | 第24-26页 |
| 2 壶菌L A M P检测方法的建立 | 第26-38页 |
| ·材料和方法 | 第26-31页 |
| ·质粒和菌株及主要试剂 | 第26页 |
| ·实验用主要仪器 | 第26-27页 |
| ·试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·引物设计及制备 | 第28页 |
| ·壶菌DNA的制备 | 第28页 |
| ·PCR的扩增 | 第28-29页 |
| ·目的基因的胶回收 | 第29页 |
| ·胶回收产物与PMD18-T simple载体的连接 | 第29页 |
| ·连接产物的转化 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第30页 |
| ·引物的验证 | 第30页 |
| ·温度的优化 | 第30-31页 |
| ·时间的优化 | 第31页 |
| ·灵敏度检测 | 第31页 |
| ·特异性检测 | 第31页 |
| ·荧光染料的使用 | 第31页 |
| ·实验结果 | 第31-36页 |
| ·引物设计 | 第31-32页 |
| ·PMD-LAMP质粒提取鉴定 | 第32页 |
| ·PCR鉴定 | 第32-33页 |
| ·壶菌引物的验证 | 第33页 |
| ·温度优化 | 第33-34页 |
| ·时间优化 | 第34页 |
| ·灵敏度检测 | 第34-35页 |
| ·特异性检测 | 第35页 |
| ·荧光染料的使用 | 第35-36页 |
| ·本章小结 | 第36-38页 |
| 3 国内两栖类壶菌病生态危害识别 | 第38-50页 |
| ·两栖类壶菌病调查方法 | 第38-40页 |
| ·调查地区的选择 | 第38-39页 |
| ·调查种类的选择 | 第39-40页 |
| ·样本数量的确定 | 第40页 |
| ·调查时间的确定 | 第40页 |
| ·检测方法的确定 | 第40页 |
| ·两栖类壶菌病调查 | 第40-42页 |
| ·实验用主要试剂 | 第40页 |
| ·实验仪器 | 第40-41页 |
| ·实验样本 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-42页 |
| ·壶菌培养结果 | 第42页 |
| ·结果分析 | 第42页 |
| ·壶菌的病理学诊断方法 | 第42-44页 |
| ·实验试剂 | 第42页 |
| ·实验仪器 | 第42页 |
| ·实验样本 | 第42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·病理组织切片结果 | 第43-44页 |
| ·两栖类壶菌病LAMP方法的检测 | 第44-45页 |
| ·实验仪器 | 第44页 |
| ·实验试剂 | 第44页 |
| ·试剂的配制 | 第44-45页 |
| ·引物设计及制备 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45页 |
| ·实验样本 | 第45页 |
| ·壶菌LAMP检测结果 | 第45页 |
| ·荧光定量PCR检测 | 第45-49页 |
| ·实验仪器 | 第45页 |
| ·实验试剂 | 第45-46页 |
| ·试剂的配制 | 第46页 |
| ·实验样本 | 第46页 |
| ·样本组织基因组DNA的提取 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47页 |
| ·定量PCR检测结果 | 第47-49页 |
| ·本章小结 | 第49-50页 |
| 4 全球壶菌风险分布分析 | 第50-60页 |
| ·两栖类壶菌输入风险来源地分析 | 第50页 |
| ·分析方法 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-58页 |
| ·结论和讨论 | 第58-60页 |
| 5 我国面临的壶菌风险分析 | 第60-107页 |
| ·方法 | 第60-61页 |
| ·传入释放评估 | 第60页 |
| ·接触发生评估 | 第60-61页 |
| ·后果评估 | 第61页 |
| ·欧洲国家输出风险分析 | 第61-70页 |
| ·英国 | 第61-63页 |
| ·西班牙 | 第63-68页 |
| ·德国 | 第68-70页 |
| ·美洲国家(美国)输出风险分析 | 第70-74页 |
| ·自然概况 | 第70-71页 |
| ·畜牧业生产状况 | 第71页 |
| ·兽医管理体制 | 第71-74页 |
| ·大洋洲国家(澳大利亚)输出风险分析 | 第74-76页 |
| ·自然概况 | 第74-75页 |
| ·畜牧业生产状况 | 第75页 |
| ·兽医管理机制 | 第75-76页 |
| ·非洲国家输出风险分析 | 第76-80页 |
| ·博茨瓦纳 | 第76-78页 |
| ·南非 | 第78-80页 |
| ·洲国家输出风险分析 | 第80-85页 |
| ·日本 | 第80-83页 |
| ·韩国 | 第83-85页 |
| ·拉丁美洲及南美洲国家输出风险分析 | 第85-91页 |
| ·智利 | 第85-89页 |
| ·厄瓜多尔 | 第89-91页 |
| ·结果 | 第91-106页 |
| ·欧洲壶菌病对我国风险评估结果 | 第91-93页 |
| ·北美洲壶菌病对我国风险评估结果 | 第93-96页 |
| ·大洋洲壶菌病对我国风险评估结果 | 第96-99页 |
| ·非洲壶菌病对我国风险评估结果 | 第99-101页 |
| ·亚洲壶菌病对我国风险评估结果 | 第101-103页 |
| ·拉丁美洲及南美洲国家壶菌病对我国风险评估结果 | 第103-106页 |
| ·讨论 | 第106-107页 |
| ·高风险输出地确认 | 第106页 |
| ·高风险两栖类物种确认 | 第106页 |
| ·确定抽样数量和比例 | 第106-107页 |
| 6 壶菌风险管理对策 | 第107-113页 |
| ·风险管理总的原则 | 第107-108页 |
| ·风险管理对策 | 第108-113页 |
| ·选择合适的诊断方法是控制疾病诊断风险的关键 | 第108页 |
| ·控制实验室管理问题造成的疾病诊断风险 | 第108-109页 |
| ·避免法规标准体系风险 | 第109页 |
| ·加强风险分析和检疫准入工作 | 第109-110页 |
| ·建立我国特色的外来动物疫病防控框架体系 | 第110页 |
| ·加强人才队伍建设 | 第110页 |
| ·信息化建设 | 第110-111页 |
| ·加强部门协调配合 | 第111页 |
| ·关注动物福利风险 | 第111-113页 |
| 结论 | 第113-114页 |
| 参考文献 | 第114-122页 |
| 附录一 | 第122-131页 |
| 附录二 | 第131-132页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第132-133页 |
| 致谢 | 第133-134页 |
