| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-10页 |
| 第1章 前言 | 第10-16页 |
| ·血吸虫病概述 | 第10-12页 |
| ·血吸虫病的种类与我国疫情分布 | 第10-11页 |
| ·日本血吸虫简介 | 第11页 |
| ·血吸虫病的防治措施 | 第11-12页 |
| ·Peroxierdoxins (Prxs)简介 | 第12-14页 |
| ·Prxs的种类和分布 | 第12-13页 |
| ·Prxs的作用机制 | 第13-14页 |
| ·蛋白质晶体学简介 | 第14-15页 |
| ·蛋白质晶体生长的原理 | 第14页 |
| ·蛋白质晶体生长的方法 | 第14-15页 |
| ·本论文研究目的、主要内容及意义 | 第15-16页 |
| 第2章 日本血吸虫过氧化物酶(synSjPrx1)的制备及结晶学研究 | 第16-36页 |
| ·引言 | 第16页 |
| ·实验材料 | 第16-18页 |
| ·实验菌株 | 第16页 |
| ·实验主要仪器 | 第16页 |
| ·实验主要药品与试剂 | 第16-17页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第17-18页 |
| ·实验方法 | 第18-23页 |
| ·SjPrx1 基因的合成 | 第18页 |
| ·N-His-synSjPrx1-pET28 质粒提取 | 第18-19页 |
| ·N-His-synSjPrx1-pET28a转化大肠杆菌BL21 宿主菌 | 第19-20页 |
| ·synSjPrx1 蛋白的小量表达及表达条件优化 | 第20-21页 |
| ·synSjPrx1 蛋白的大量表达及Ni~(2+)预装柱初步纯化 | 第21-22页 |
| ·synSjPrx1 蛋白透析条件优化 | 第22页 |
| ·DEAE离子交换柱进一步纯化synSjPrx1 蛋白 | 第22页 |
| ·synSjPrx1 蛋白酶活实验 | 第22-23页 |
| ·synSjPrx1 蛋白结晶条件筛选 | 第23页 |
| ·晶体条件优化 | 第23页 |
| ·synSjPrx1 晶体数据收集及结构解析 | 第23页 |
| ·实验结果 | 第23-32页 |
| ·SjPrx1 基因的合成 | 第23-24页 |
| ·synSjPrx1 小量表达及条件优化 | 第24页 |
| ·synSjPrx1Ni~(2+)亲和层析初步纯化 | 第24-25页 |
| ·synSjPrx1 目的蛋白透析液条件优化 | 第25页 |
| ·DEAE离子交换柱进一步纯化目的蛋白 | 第25-26页 |
| ·synSjPrx1 蛋白酶活实验 | 第26-28页 |
| ·synSjprx1 蛋白晶体筛选及条件优化 | 第28页 |
| ·synSjPrx1 蛋白晶体数据收集及结构解析 | 第28-32页 |
| ·讨论与小结 | 第32-36页 |
| ·synSjPrx1-pET28a的构建及表达 | 第32页 |
| ·synSjPrx1 蛋白晶体结构解析 | 第32-34页 |
| ·synSjprx1 蛋白溶液的稳定性及反应机制 | 第34-36页 |
| 第3章 日本血吸虫过氧化物酶(wtSjPrx1)的制备及晶体生长 | 第36-54页 |
| ·引言 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36-37页 |
| ·实验菌株 | 第36页 |
| ·实验主要仪器 | 第36页 |
| ·实验药品与试剂 | 第36-37页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第37页 |
| ·实验方法 | 第37-44页 |
| ·SjPrx1 蛋白的生物信息学分析 | 第37页 |
| ·wtSjPrx1 基因的扩增及扩增产物的回收 | 第37-39页 |
| ·线性化载体的制备 | 第39-40页 |
| ·wtSjPrx1-pET28a和wtSjPrx1-pET42a重组质粒的连接与转化 | 第40-41页 |
| ·重组质粒wtSjPrx1-pET28a和wtSjPrx1-pET42a的鉴定 | 第41-42页 |
| ·wtSjPrx1-pET28a-BL21 和wtSjPrx1-pET42a-BL21 表达宿主菌的获取 | 第42-43页 |
| ·蛋白的小量表达验证及表达条件优化 | 第43页 |
| ·蛋白的大量表达及Ni~(2+)预装柱初步纯化 | 第43-44页 |
| ·DEAE离子交换柱进一步纯化目的蛋白 | 第44页 |
| ·wtSjPrx1-pET28a和wtSjPrx1-pET42a重组蛋白晶体条件筛选及条件优化 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-52页 |
| ·SjPrx1 蛋白生物信息学分析 | 第44-45页 |
| ·PCR扩增及扩增产物回收 | 第45页 |
| ·重组质粒wtSjPrx1-pET28a和wtSjPrx1-pET42a的鉴定 | 第45-47页 |
| ·小量表达及条件优化 | 第47-48页 |
| ·Ni~(2+)预装柱初步纯化目的蛋白 | 第48-50页 |
| ·DEAE离子交换柱进一步纯化目的蛋白 | 第50-51页 |
| ·SjPrx1 蛋白晶体筛选及条件优化 | 第51-52页 |
| ·讨论与小结 | 第52-54页 |
| ·wtSjPrx1-pET28a和wtSjPrx1-pET42a载体质粒的构建 | 第52-53页 |
| ·wtSjPrx1-pET28a和wtSjPrx1-pET42a重组蛋白的表达与纯化 | 第53-54页 |
| 第4章 日本血吸虫过氧化物酶wtSjPrx2 和wtSjPrx3 的重组表达与纯化 | 第54-71页 |
| ·引言 | 第54页 |
| ·实验材料 | 第54-55页 |
| ·实验菌株 | 第54页 |
| ·实验主要仪器 | 第54页 |
| ·实验主要试剂 | 第54-55页 |
| ·培养基及相关溶液配制 | 第55页 |
| ·实验方法 | 第55-61页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 蛋白的生物信息学分析 | 第55页 |
| ·SjPrx2 和SjPrx3 基因的扩增及扩增产物的纯化 | 第55-57页 |
| ·pET28a线性化载体的制备 | 第57页 |
| ·wtSjPrx2-pET28a和wtSjPrx-pET28a重组质粒的连接与转化 | 第57-58页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第58-60页 |
| ·重组质粒wtSjPrx2-pET28a-BL21 和wtSjPrx3-pET28a-BL21 表达宿主菌的获取 | 第60页 |
| ·小量表达验证及条件优化 | 第60页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 蛋白的表达与纯化 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-70页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 生物信息学初步分析结果 | 第61-62页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 基因的PCR产物及回收DNA电泳 | 第62页 |
| ·wtSjPrx2-pET28a和wtSjPrx3-pET28a重组质粒菌落PCR鉴定 | 第62-63页 |
| ·wtSjPrx2-pET28a和wtSjPrx3-pET28a重组质粒的酶切验证 | 第63-64页 |
| ·wtSjPrx2-pET28a和wtSjPrx3-pET28a重组质粒DNA测序验证 | 第64页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 蛋白在大肠杆菌中的小量表达及条件优化 | 第64-66页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 蛋白Ni~(2+)亲和层析柱初步纯化 | 第66-67页 |
| ·wtSjPrx2 和wtSjPrx3 蛋白DEAE离子交换柱进一步纯化 | 第67-70页 |
| ·讨论与小结 | 第70-71页 |
| ·wtSjPrx2 蛋白的表达与纯化 | 第70页 |
| ·wtSjPrx3 蛋白的表达与纯化 | 第70-71页 |
| 第5章 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录Ⅰ 英文缩写对照表 | 第77-78页 |
| 附录Ⅱ synSjPrx1-pET28a合成基因质粒图谱 | 第78-79页 |
| 附录Ⅲ 主要仪器 | 第79-80页 |
| 附录Ⅳ 硕士期间发表论文 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81页 |
