| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-18页 |
| ·蛋壳品质的研究意义 | 第9页 |
| ·禽类蛋壳的作用 | 第9页 |
| ·蛋壳品质研究的经济意义 | 第9页 |
| ·蛋壳的成分及形成过程 | 第9-10页 |
| ·蛋壳的组成成分 | 第9页 |
| ·蛋壳的形成过程 | 第9-10页 |
| ·蛋壳基质研究进展 | 第10-11页 |
| ·蛋壳壳膜 | 第10页 |
| ·基质蛋白 | 第10-11页 |
| ·特异性基质蛋白 | 第10-11页 |
| ·一般性蛋白 | 第11页 |
| ·蛋清蛋白 | 第11页 |
| ·糖胺聚糖研究进展 | 第11-15页 |
| ·糖胺聚糖的种类及内部结构区别 | 第12页 |
| ·糖胺聚糖的合成 | 第12-15页 |
| ·四糖连接区域的合成 | 第12-14页 |
| ·二糖重复单位延伸 | 第14页 |
| ·CS/DS 翻译后修饰 | 第14-15页 |
| ·糖胺聚糖的生物功能研究 | 第15页 |
| ·OC-116 蛋白多糖研究进展 | 第15-17页 |
| ·本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 第二章 鸡 OC-116 编码基因真核表达载体的筛选 | 第18-40页 |
| ·实验材料 | 第18-21页 |
| ·质粒 | 第18页 |
| ·真核细胞 | 第18页 |
| ·细胞培养及转染试剂 | 第18-19页 |
| ·Western Blot 试剂 | 第19页 |
| ·其他试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19页 |
| ·溶液的配制 | 第19-20页 |
| ·引物设计 | 第20-21页 |
| ·实验方法 | 第21-31页 |
| ·重组质粒的转化与培养 | 第21页 |
| ·质粒提取 | 第21-23页 |
| ·质粒小提 | 第21-22页 |
| ·无内毒素质粒大提 | 第22-23页 |
| ·CHO 细胞培养 | 第23-24页 |
| ·细胞培养液配制 | 第23页 |
| ·细胞复苏 | 第23页 |
| ·细胞传代 | 第23-24页 |
| ·细胞冻存 | 第24页 |
| ·转染 | 第24-25页 |
| ·RNA 提取 | 第25-26页 |
| ·cDNA 制备 | 第26-27页 |
| ·荧光定量 PCR | 第27页 |
| ·细胞蛋白提取及浓度检测 | 第27-28页 |
| ·细胞总蛋白提取 | 第27-28页 |
| ·总蛋白浓度检测 | 第28页 |
| ·Western Blot 检测 | 第28-31页 |
| ·数据分析 | 第31页 |
| ·结果与分析 | 第31-38页 |
| ·鸡 OC-116 真核表达载体转染条件的优化 | 第31-32页 |
| ·转染质粒使用量的优化 | 第31-32页 |
| ·转染时间的优化 | 第32页 |
| ·鸡 OC-116 编码基因真核表达 Real-time PCR 检测体系的优化 | 第32-36页 |
| ·RNA 提取结果 | 第32-33页 |
| ·OC-116 基因 Real-time PCR 引物的优化 | 第33-35页 |
| ·OC-116 基因 Real-time PCR 反应中疑似气溶胶污染 | 第35-36页 |
| ·鸡 OC-116 编码基因真核表达载体的筛选 | 第36-38页 |
| ·待鉴定重组质粒转录本表达效率的比较 | 第36-37页 |
| ·待鉴定重组质粒蛋白表达效率的 Western blotting 检测 | 第37-38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| ·转染条件优化 | 第38页 |
| ·鸡 OC-116 编码基因真核表达 Real-time PCR 检测体系的优化 | 第38-39页 |
| ·荧光定量 PCR 引物优化 | 第38-39页 |
| ·气溶胶污染现象 | 第39页 |
| ·鸡 OC-116 编码基因真核表达载体的筛选 | 第39-40页 |
| 第三章 鸡 OC-116 翻译后糖胺聚糖修饰相关酶的初步鉴定 | 第40-56页 |
| ·实验材料 | 第40-41页 |
| ·细胞材料 | 第40页 |
| ·基础培养基 | 第40页 |
| ·其他试剂 | 第40页 |
| ·Western Blot 试剂 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·溶液配置 | 第41页 |
| ·实验方法 | 第41-44页 |
| ·鸡子宫上皮细胞培养 | 第41-42页 |
| ·鸡子宫上皮细胞完全培养液配方 | 第41页 |
| ·冻存液配方 | 第41页 |
| ·差速贴壁传代 | 第41-42页 |
| ·细胞冻存 | 第42页 |
| ·细胞复苏 | 第42页 |
| ·细胞总蛋白提取及浓度检测 | 第42页 |
| ·Western Blot 检测 | 第42页 |
| ·引物设计 | 第42-44页 |
| ·cDNA 的制备 | 第44页 |
| ·RNA 提取 | 第44页 |
| ·反转录 | 第44页 |
| ·荧光定量 PCR | 第44页 |
| ·数据分析 | 第44页 |
| ·结果与分析 | 第44-54页 |
| ·鸡 OC-116 编码基因真核表达重组子在鸡细胞中的糖胺聚糖修饰鉴定 | 第44-46页 |
| ·鸡子宫内皮细胞中糖胺聚糖修饰酶的表达分析 | 第46-50页 |
| ·鸡子宫内皮细胞转染验证 | 第46-47页 |
| ·鸡子宫内皮细胞中糖胺聚糖修饰酶的表达分析 | 第47-50页 |
| ·鸡 OC-116 翻译后糖胺聚糖修饰相关酶的初步鉴定 | 第50-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·鸡 OC-116 编码基因真核表达重组子在鸡细胞中的糖胺聚糖修饰鉴定 | 第54页 |
| ·鸡子宫内皮细胞中糖胺聚糖修饰酶的表达分析 | 第54-55页 |
| ·鸡 OC-116 翻译后糖胺聚糖修饰相关酶的初步鉴定 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
