| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 前言 | 第11-16页 |
| 参考文献 | 第12-16页 |
| 第一部分 miR-21调节MSH2表达在肺腺癌A549细胞中的作用研究 | 第16-39页 |
| PartⅠ miR-21负性调控MSH2的表达 | 第16-27页 |
| 1 实验材料 | 第16-18页 |
| ·菌种 | 第16页 |
| ·细胞系 | 第16页 |
| ·主要试剂 | 第16页 |
| ·主要仪器 | 第16-17页 |
| ·常用试剂的配制 | 第17-18页 |
| 2 实验方法 | 第18-25页 |
| ·pcDNA-GFP-msh-3'UTR载体构建 | 第18-21页 |
| ·MSH2-3’UTR引物设计、合成以及PCR扩增 | 第18页 |
| ·MSH2-3’UTR与T载体连接及产物的克隆 | 第18-20页 |
| ·PCDNA-GFP-MSH2-3'UTR 载体构建 | 第20-21页 |
| ·pcDNA-GFP载体骨架与MSH2-3’UTR片段的连接与克隆 | 第21页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第21页 |
| ·重组质粒蹄选出的阳性克隆保种 | 第21页 |
| ·MSH2基因相关miRNAs的合成 | 第21页 |
| ·pcDNA-GFP-msh2-3'UTR载体的中量提取及纯化 | 第21-22页 |
| ·A549细胞的复苏、培养、传代、冻存与传板 | 第22-23页 |
| ·pcDNA-GFP-msh2-3'UTR载体与miR-21共转染A549细胞 | 第23页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达 | 第23页 |
| ·Western blotting检测miR-21对MSH2的调控作用 | 第23-25页 |
| 3 实验结果 | 第25-27页 |
| ·重组载体pcDNA-GFP-msh2-3'UTR酶切鉴定结果 | 第25页 |
| ·MSH2基因相关miRNA预测结果 | 第25页 |
| ·荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP表达结果 | 第25-26页 |
| ·Western blotting检测miR-21调控MSH2的表达结果 | 第26-27页 |
| PartⅡ miR-21调节MSH2表达对肺腺癌A549细胞增殖和调亡的影响 | 第27-36页 |
| 1 实验材料 | 第27-28页 |
| ·主要试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器 | 第27页 |
| ·常用试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-32页 |
| ·Real-time PCR检测顺铂作用于A549细胞后miR-21表达变化 | 第28-30页 |
| ·顺铂处理A549细胞 | 第28页 |
| ·顺铂治疗A549肺腺癌细胞移植瘤 | 第28页 |
| ·提取细胞总RNA | 第28-29页 |
| ·miR-21的加尾及反转录 | 第29-30页 |
| ·PCR 反应 | 第30页 |
| ·Western blotting检测miR-21对MSH2表达的作用 | 第30-31页 |
| ·顺铂处理A549细胞 | 第30页 |
| ·顺铂治疗A549肺腺癌细胞移植瘤 | 第30页 |
| ·细胞总蛋白的提取 | 第30-31页 |
| ·Western blotting 检测 MSH2 的表达 | 第31页 |
| ·MTT检测miR-21对A549细胞增殖的影响 | 第31页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测转染miR-21调控MSH2表达的后细胞的凋亡率 | 第31-32页 |
| 3 实验结果 | 第32-35页 |
| ·Real-time PCR检测顺铂处理细胞后miR-21表达结果 | 第32-33页 |
| ·Western blotting检测降低miR-21表达后MSH2的表达结果 | 第33页 |
| ·MTT检测降低miR-21表达后细胞的增殖抑制率结果 | 第33-34页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测升高MSH2表达后细胞的凋亡 | 第34页 |
| ·裸鼠移植瘤大小检测结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-39页 |
| 第二部分 miR-140/miR-206在肺腺癌发病中的作用研究 | 第39-63页 |
| PartⅠ miR-140/miR-206参与TGF-β1信号通路 | 第39-53页 |
| 1 实验材料 | 第39页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·主要试剂 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·常用试剂的配制 | 第39页 |
| 2 实验方法 | 第39-48页 |
| ·pcDNA-GFP-smad3-3'UTR载体构建 | 第39-42页 |
| ·Smad3基因相关miRNAs的合成 | 第42页 |
| ·pcDNA-GFP-smad3-3'UTR载体的中量提取及纯化 | 第42页 |
| ·peDNA-GFP-smad3-3'UTR载体与miR-140、miR-206共转染肺腺癌细胞 | 第42-43页 |
| ·荧光显微镜和流式细胞仪检测GFP的表达 | 第43页 |
| ·siRNA-Smad3的合成、筛选及Smad3表达的检测 | 第43-44页 |
| ·Western blotting检测miR-140/miR-206、TGF-β1、SB431542对Smad3、p-Smad3的调控作用 | 第44-45页 |
| ·miR-140、miR-206转染细胞 | 第44-45页 |
| ·Westenr blotting 检测 Smad3、p-Smad3 的表达 | 第45页 |
| ·Real-time PCR检测TGF-β1对miR-140、miR-206的表达作用 | 第45-48页 |
| 3 实验结果 | 第48-53页 |
| ·Smad3-3'UTR的PCR扩增结果 | 第48页 |
| ·T-Smad3-3’UTR的鉴定结果 | 第48页 |
| ·pcDNA-GFP-Smad3-3'UTR重组载体的鉴定结果 | 第48-49页 |
| ·荧光显微镜及流式细胞仪检测GFP表达结果 | 第49-50页 |
| ·siRNA-Smad3的筛选及Smad3表达检测结果 | 第50-51页 |
| ·Western blotting检测miR-140、miR-206调控Smad3、p-Samd3表达的结果 | 第51页 |
| ·Western blotting检测TGF-β1、SB431542调控Smad3、p-Samd3表达的结果 | 第51-52页 |
| ·Real-time PCR检测TGF-β1处理细胞后miR-140、miR-206的表达结果 | 第52-53页 |
| PartⅡ miR-140/miR-206对肺腺癌细胞增殖和转移的作用 | 第53-60页 |
| 1 实验材料 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-55页 |
| ·Western blotting检测miR-140、miR-206对Smad3下游基因TRIB2的调控作用 | 第53页 |
| ·MTT检测miR-140、miR-206对A549细胞增殖的影响 | 第53页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测细胞的凋亡率 | 第53页 |
| ·裸鼠移植瘤实验检测miR-140、miR-206对肿瘤生长的影响 | 第53-54页 |
| ·裸鼠移植瘤瘤体中miR-140、miR-206及p-Smad3和Smad3表达的检测 | 第54页 |
| ·Transwell迁移实验检测细胞迁移情况 | 第54页 |
| ·miR-140、miR-206对细胞转移的检测 | 第54-55页 |
| 3 实验结果 | 第55-58页 |
| ·Western blotting检测TRIB2基因的表达结果 | 第55页 |
| ·MTT检测miR-140、miR-206细胞增殖的抑制结果 | 第55页 |
| ·Annexin V-FITC/PI双染检测细胞凋亡 | 第55-56页 |
| ·裸鼠移植瘤大小检测结果 | 第56页 |
| ·裸鼠移植瘤瘤体miR-140、miR-206及p-Smad3和Smad3表达检测结果 | 第56-57页 |
| ·Transwell迁移实验检测结果 | 第57-58页 |
| ·miR-140、miR-206对细胞转移的检测结果 | 第58页 |
| 4 讨论 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 小结与后期研究计划 | 第63-64页 |
| 文献综述 | 第64-70页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 研究生期间发表的文章 | 第71页 |
