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口蹄疫基因工程病毒拯救及其舌下免疫研究

摘要第1-4页
ABSTRACT第4-6页
文缩略表第6-12页
第一章 文献综述第12-28页
   ·口蹄疫病毒及其流行病学第12-15页
     ·O 型口蹄疫病毒第14页
     ·A 型口蹄疫病毒第14页
     ·亚洲 1 型口蹄疫病毒第14页
     ·南非 1、2 和 3 型口蹄疫病毒第14页
     ·C 型口蹄疫病毒第14-15页
   ·口蹄疫准种研究进展第15-19页
     ·错配倾向的复制和病毒准种第15-16页
     ·错误灾变第16页
     ·病毒准种、适合度和进化选择第16-17页
     ·口蹄疫病毒准种特性第17-18页
     ·口蹄疫准种株的量化第18页
     ·口蹄疫准种的优势株与劣势株第18-19页
   ·口蹄疫疫苗第19-24页
     ·灭活疫苗第20页
     ·紧急疫苗第20页
     ·油佐剂疫苗第20-21页
     ·氢氧化铝疫苗第21页
     ·可饲疫苗第21页
     ·抗原表位疫苗第21页
     ·核酸疫苗第21-22页
     ·合成肽疫苗第22页
     ·病毒样颗粒疫苗第22-23页
     ·病毒载体疫苗第23页
     ·基因工程病毒灭活疫苗第23页
     ·弱毒活疫苗第23-24页
     ·疫苗佐剂与病毒抑制剂第24页
   ·口蹄疫天然免疫第24-28页
     ·巨噬细胞(Macrophages,MΦ)第24-25页
     ·树突状细胞(Dendritic cells,DC)第25-26页
     ·淋巴细胞(Lymphocytes)第26页
     ·非免疫细胞(non-immunological cells)第26页
     ·干扰素(I interferon type I)第26-27页
     ·天然免疫反应(Innate immune response)第27-28页
第二章 口蹄疫病毒基因组的遗传变异分析第28-37页
   ·前言第28-29页
   ·材料和方法第29-30页
     ·口蹄疫基因组序列第29页
     ·口蹄疫基因组同源性分析第29页
     ·口蹄疫病毒基因组序列的多重排比和进化关系分析第29页
     ·口蹄疫病毒基因组的非编码区二级结构预测第29-30页
   ·结果第30-34页
     ·口蹄疫病毒基因组结构与各组分的大小第30页
     ·口蹄疫病毒基因组的变异性和保守性第30-33页
     ·口蹄疫病毒基因组的进化关系第33-34页
   ·讨论第34-36页
   ·小结第36-37页
第三章 O 型口蹄疫病毒基因组的遗传变异第37-46页
   ·前言第37页
   ·材料与方法第37-39页
     ·酶及主要试剂第37-38页
     ·溶液及其配制第38页
     ·仪器第38页
     ·病毒 RNA 的提取第38页
     ·引物设计第38页
     ·目的片段扩增第38页
     ·产物的回收与纯化第38-39页
     ·病毒基因组测序第39页
     ·口蹄疫基因组序列第39页
     ·口蹄疫基因组同源性分析第39页
     ·口蹄疫病毒基因组序列的多重排比和进化关系分析第39页
   ·结果第39-44页
     ·O 型口蹄疫病毒基因组同源性分析第39-43页
     ·口蹄疫病毒基因组的进化关系第43-44页
   ·讨论第44-46页
第四章 口蹄疫病毒全长构建和拯救第46-54页
   ·前言第46-47页
   ·材料与方法第47-49页
     ·生物酶和试剂第47页
     ·引物设计第47页
     ·细胞和种毒第47-48页
     ·体外转录 RNA 的制备第48页
     ·转染 BHK-21 细胞第48页
     ·电子显微镜观察第48页
     ·PCR 法检测病毒基因组第48页
     ·间接免疫荧光检测病毒第48-49页
     ·病毒蚀斑实验第49页
     ·乳鼠毒力实验第49页
   ·结果第49-52页
     ·体外转录结果第49-50页
     ·细胞病变观察第50页
     ·电镜结果第50页
     ·PCR 鉴定结果第50-51页
     ·免疫荧光检测结果第51页
     ·蚀斑实验第51-52页
     ·乳鼠毒力试验第52页
   ·讨论第52-54页
第五章 口蹄疫基因工程病毒灭活疫苗舌下免疫研究第54-63页
   ·前言第54页
   ·材料与方法第54-57页
     ·病毒、细胞和实验动物第54页
     ·主要试剂及配制第54页
     ·病毒培养第54-55页
     ·病毒的灭活第55页
     ·病毒的纯化第55-56页
     ·病毒 146S 含量测定第56页
     ·动物免疫和 ELISA 检测第56页
     ·病毒中和试验第56页
     ·淋巴细胞转化试验第56-57页
     ·肺脏和肠道洗液的收集第57页
     ·肺脏和肠道中 IgA 检测第57页
     ·统计学分析第57页
   ·结果第57-61页
     ·基因工程病毒灭活检测第57-58页
     ·基因工程病毒抗体的测定第58-59页
     ·口蹄疫基因工程病毒黏膜抗体测定第59-60页
     ·淋巴细胞增殖检测第60页
     ·细胞因子水平检测第60-61页
     ·基因工程病毒灭活疫苗的动物攻毒实验第61页
     ·乳鼠免疫保护实验第61页
   ·讨论第61-62页
   ·小结第62-63页
第六章 口蹄疫病毒缺失毒株构建和拯救第63-70页
   ·前言第63页
   ·材料与方法第63-65页
     ·菌株、试验动物及试剂第63页
     ·溶液及其配制第63页
     ·质粒构建和 RNA 体外转录第63-64页
     ·转染和口蹄疫病毒 RNA 定量第64页
     ·病毒增长曲线第64页
     ·病毒中和试验第64-65页
     ·统计学分析第65页
   ·结果第65-68页
   ·讨论第68-70页
第七章 口蹄疫缺失病毒核酸疫苗舌下免疫研究第70-79页
   ·前言第70-71页
   ·材料与方法第71-73页
     ·疫苗与动物第71页
     ·主要试剂第71页
     ·壳聚糖纳米粒制备第71页
     ·动物和免疫第71页
     ·病毒中和试验第71-72页
     ·淋巴细胞转化试验第72页
     ·ELISA 检测抗体水平第72-73页
   ·结果第73-76页
     ·IgG 水平检测第73页
     ·IgA 水平检测第73-74页
     ·淋巴细胞增值试验第74-75页
     ·粘膜免疫水平检测第75页
     ·细胞微量中和试验第75-76页
     ·豚鼠免疫保护实验第76页
     ·乳鼠免疫保护实验第76页
   ·讨论第76-77页
   ·小结第77-79页
参考文献第79-104页
致谢第104-105页
作者简历第105-108页

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