| 符号说明 | 第1-9页 |
| 中文摘要 | 第9-10页 |
| 英文摘要 | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-30页 |
| ·大岩桐组织培养 | 第12-15页 |
| ·植物转基因技术 | 第15-19页 |
| ·组织培养 | 第15-16页 |
| ·转化体系 | 第16-19页 |
| ·原生质体转化 | 第16页 |
| ·基因枪法转化 | 第16-17页 |
| ·农杆菌介导的转化 | 第17页 |
| ·其它可选择的转基因方法 | 第17-18页 |
| ·完整植株的转化 | 第18-19页 |
| ·报告基因 | 第19页 |
| ·筛选 | 第19页 |
| ·CBF 基因与植物的抗寒性 | 第19-23页 |
| ·CBF 转录因子的发现 | 第19-20页 |
| ·CBF 转录因子的结构特点及其特性 | 第20-21页 |
| ·CBF 转录因子对 COR 基因的调控作用 | 第21-22页 |
| ·植物抗冷机制中调控 CBF 转录因子的相关基因 | 第22-23页 |
| ·ICE 基因 | 第22-23页 |
| ·HOS1 基因 | 第23页 |
| ·CBF 转录因子的应用前景 | 第23页 |
| ·LEAFY 基因与植物的花发育 | 第23-26页 |
| ·LEAFY 转录因子的发现 | 第23-24页 |
| ·LEAFY 基因的表达特性 | 第24页 |
| ·影响 LEAFY 基因表达的因素 | 第24-25页 |
| ·内因 | 第24-25页 |
| ·生理因子 | 第25页 |
| ·外因 | 第25页 |
| ·LEAFY 基因的应用 | 第25-26页 |
| ·大岩桐转基因 | 第26-29页 |
| ·研究现状 | 第26-27页 |
| ·存在问题及解决方法 | 第27-28页 |
| ·表达载体的选择 | 第27-28页 |
| ·大岩桐悬浮细胞培养及农杆菌介导的悬浮细胞的转化 | 第28页 |
| ·由原生质体途径进行植株再生以及原生质体的转化 | 第28页 |
| ·展望 | 第28-29页 |
| ·本实验的目的意义 | 第29-30页 |
| 2 材料与方法 | 第30-43页 |
| ·实验材料 | 第30-32页 |
| ·植物材料与组织培养条件 | 第30页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·酶与各种生化试剂 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第31-32页 |
| ·实验方法 | 第32-43页 |
| ·大岩桐组织培养 | 第32-33页 |
| ·外植体消毒 | 第32-33页 |
| ·组织培养 | 第33页 |
| ·驯化移栽 | 第33页 |
| ·拟南芥 CBF1、LEAFY 基因表达载体构建 | 第33-41页 |
| ·拟南芥 CBF1、LEAFY 基因的 PCR 扩增 | 第33-34页 |
| ·拟南芥 CBF1、LEAFY 基因 PCR 扩增产物的回收 | 第34-35页 |
| ·SDS 减法大量提质粒 | 第35-36页 |
| ·用 BamH I/Xma I 和 Sac I 双酶切目的片段 PCR 产物和表达载体 pBI121 | 第36页 |
| ·目的片段与载体 pBI121 双酶切回收产物连接 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36-37页 |
| ·连接产物的转化 | 第37页 |
| ·菌液 PCR | 第37-38页 |
| ·小量碱法提取质粒 DNA | 第38-39页 |
| ·质粒 DNA 的双酶切鉴定 | 第39页 |
| ·拟南芥 CBF1、LEAFY 基因的序列测定 | 第39页 |
| ·农杆菌感受态细胞的制备 | 第39-40页 |
| ·农杆菌的转化 | 第40页 |
| ·农杆菌菌液 PCR | 第40页 |
| ·农杆菌 Mini-Ti 质粒的提取 | 第40-41页 |
| ·大岩桐遗传转化 | 第41-43页 |
| ·红、紫色花重瓣大岩桐叶柄、叶片愈伤组织及不定芽的诱导 | 第41页 |
| ·叶片筛选压的确定 | 第41页 |
| ·生根筛选压的确定 | 第41页 |
| ·根癌农杆菌介导 CBF1/LEAFY 转化大岩桐 | 第41-42页 |
| ·CTAB 法小量提取大岩桐基因组 DNA | 第42页 |
| ·大岩桐过氧化氢积累量的测定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-56页 |
| ·大岩桐组织培养 | 第43-44页 |
| ·不定芽的诱导 | 第43页 |
| ·不定芽的继代增殖 | 第43页 |
| ·不定芽的生根 | 第43页 |
| ·大岩桐球茎不定芽的诱导 | 第43页 |
| ·组培苗的移栽 | 第43-44页 |
| ·拟南芥 CBF1、LEAFY 基因表达载体构建 | 第44-49页 |
| ·pBI121-AtCBF1 表达载体构建 | 第44-47页 |
| ·CBF1 基因的克隆 | 第44-45页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第45页 |
| ·重组质粒 pBI121-AtCBF1 双酶切鉴定 | 第45-46页 |
| ·测序 | 第46页 |
| ·重组质粒 pBI121-AtCBF1 转化农杆菌 LBA4404 | 第46-47页 |
| ·pBI121-AtLEAFY 表达载体构建 | 第47-49页 |
| ·LEAFY 基因的克隆 | 第47页 |
| ·重组质粒的 PCR 鉴定 | 第47-48页 |
| ·重组质粒 pBI121-AtLEAFY 双酶切鉴定 | 第48页 |
| ·测序 | 第48-49页 |
| ·重组质粒 pBI121-AtLEAFY 转化农杆菌 LBA4404 | 第49页 |
| ·大岩桐遗传转化 | 第49-56页 |
| ·红色大岩桐叶柄、叶片愈伤组织及芽诱导 | 第49-51页 |
| ·紫色大岩桐叶柄、叶片愈伤组织及芽诱导 | 第51页 |
| ·叶片筛选压确定 | 第51-52页 |
| ·生根筛选压确定 | 第52-53页 |
| ·转化小苗获得 | 第53-54页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第54-55页 |
| ·低温胁迫对野生型和 CBF1 转基因大岩桐植株过氧化氢积累量的影响 | 第55-56页 |
| 4 讨论 | 第56-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-69页 |
| 致谢 | 第69页 |
