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COL7及FOF1参与调控拟南芥发育的生化分析

摘要第1-7页
Abstract第7-9页
英文缩写词第9-17页
第1章 绪论第17-41页
   ·CONSTANS (CO)及 CONSTANS-LIKEs (COLs)的研究进展第17-19页
     ·CONSTANS 基因家族分类第17页
     ·CONSTANS (CO)第17页
     ·COLs 的功能研究进展第17-18页
     ·COL1 与 COL2 的研究进展第18-19页
   ·避荫反应第19-25页
     ·避荫的介绍第19-20页
     ·避荫反应综合症第20页
     ·光受体调节避荫反应第20-24页
     ·其它参与避荫的信号第24-25页
   ·蓝光受体的介绍第25-29页
     ·隐花色素第25-27页
     ·隐花色素相互作用的蛋白及其信号转导途径第27-29页
   ·趋光色素 (PHOTOTROPINs)第29-30页
   ·LOV/F-box/Kelch 结构的蓝光受体 (ZTL, FKF, LKP2)第30-31页
   ·26S 蛋白酶体的介绍第31-38页
     ·泛素/26S 蛋白酶体途径的组成第31页
     ·泛素 (Ubiquitin, Ub)第31-32页
     ·26S 蛋白酶体第32-33页
     ·E1,泛素激活酶 (ubiquitin activating enzyme, E1)第33页
     ·E2,泛素结合酶 (ubiquitin conjugating enzyme, E2)第33页
     ·E3,泛素蛋白连接酶 (ubiquitin-protein ligating enzyme, E3)第33-38页
   ·韧皮部凝集素 PP2 (Phloem Protein 2)蛋白第38-41页
     ·比较葫芦、芹菜、拟南芥 PP2 蛋白第38-39页
     ·拟南芥韧皮部凝集素 PP2 (Phloem Protein 2)蛋白第39-41页
第2章 过量表达 CONSTANS-LIKE 7 在长日条件下影响拟南芥开花第41-50页
   ·材料与方法第41-43页
     ·实验材料第41-43页
   ·结果与讨论第43-49页
     ·在长日下过量表达 COL7 抑制拟南芥开花第43-45页
     ·过量表达 COL7 抑制开花是通过下调 CO 与 FT 的表达第45页
     ·在维管束中能检测到 COL7 的表达第45-46页
     ·COL7 编码一个核定位蛋白及在不同发育时期的表达第46-47页
     ·COL7 的表达受生物钟及光调控第47-49页
   ·讨论第49-50页
第3章 CONSTANS-LIKE 7 在拟南芥里参与调节分枝以及避荫反应第50-59页
   ·材料与方法第50-51页
     ·实验材料第50-51页
     ·RNA 的提取以及分析第51页
     ·载体构建以及植物转化第51页
     ·免疫印迹 (Western blotting)第51页
   ·结果与讨论第51-58页
     ·在低密度种植条件下 COL7 促进分枝第51-53页
     ·COL7 在低比值的 R/FR 的光下参与调节下胚轴第53-54页
     ·COL7 mRNA 及蛋白响应低比值的 R/FR第54-56页
     ·COL7 在低比例的 R/FR 条件下促进 PIL1 的表达第56-58页
   ·讨论第58-59页
第4章 CONSTANS-LIKE 7过量表达降低白光和蓝光下拟南芥幼苗花青素及叶绿素的含量第59-64页
   ·材料与方法第59-60页
     ·实验材料第59页
     ·花青素和叶绿素含量测定第59-60页
   ·结果与讨论第60-62页
     ·COL7 过量表达导致拟南芥幼苗在白光和蓝光下黄化第60页
     ·COL7 过量表达降低白光和蓝光下拟南芥幼苗中花青素和叶绿素的含量第60-61页
     ·盐胁迫加剧蓝光下 COL7 过量表达幼苗黄化现象第61-62页
     ·盐胁迫影响蓝光下幼苗中花青素和叶绿素的含量第62页
   ·讨论第62-63页
   ·结论第63-64页
第5章 F-BOX OF FLOWERING 1 (FOF1) 参与调控拟南芥开花第64-80页
   ·材料与方法第64-68页
     ·实验材料第64页
     ·载体构建第64-65页
     ·植物转化及 GUS 染色第65页
     ·蛋白提取缓冲液第65页
     ·进化树分析第65页
     ·LUC 荧光拍摄及分析第65页
     ·RNA 的提取以及分析第65页
     ·GFP 荧光信号的检测第65页
     ·免疫荧光信号亚细胞定位第65-66页
     ·免疫印迹 (western blot)第66-68页
   ·结果与讨论第68-79页
     ·PP2-B 家族基因第68-71页
     ·FOF1 是调控拟南芥开花的负调控因子第71-75页
     ·FOF1 可以在细胞核内被检测到第75-76页
     ·PP2-B 家族基因在 fof1-cs 的表达第76-77页
     ·FOF1 的表达分析第77-78页
     ·FOF1 抑制开花是通过抑制 FT 的表达第78-79页
   ·讨论第79-80页
第6章 FOF1 与 CIB1 相互作用第80-88页
   ·材料与方法第80-83页
     ·实验材料第80页
     ·酵母杂交第80-81页
     ·表达蛋白载体及诱导纯化第81页
     ·体外 IP 实验第81-82页
     ·Split-LUC 载体及瞬时表达第82页
     ·LUC 活性测量第82-83页
     ·免疫共沉淀 (CO-IP)实验第83页
   ·结果与讨论第83-87页
     ·FOF1 与 CIB1 在酵母里相互作用第83-84页
     ·FOF1 与 CIB1 在体外相互作用第84-86页
     ·FOF1 与 CIB1 在植物体内相互作用第86-87页
   ·讨论第87-88页
第7章 FOF1 促进 CIB1 降解第88-96页
   ·材料与方法第88-90页
     ·实验材料第88页
     ·酵母菌株第88页
     ·GAL4 系统第88-90页
     ·免疫印迹 (western blot)第90页
   ·结果与讨论第90-95页
     ·CIB1 在蓝光下稳定第90-91页
     ·CIB1 的降解是通过 26S 蛋白酶体第91-92页
     ·FOF1 是 SCF 的组分之一第92页
     ·FOF1 促进 CIB1 的降解第92-94页
     ·CIB1 促进 fof1-cs 开花第94-95页
   ·讨论第95-96页
第8章 ZTL 稳定 CIB1 的分子机理第96-104页
   ·材料与方法第96页
     ·实验材料第96页
     ·酵母双杂交第96页
     ·免疫印迹 (western blot)第96页
     ·免疫共沉淀 (CO-IP)第96页
     ·LUC 活性测量第96页
     ·LUC 荧光拍摄及分析第96页
   ·结果与讨论第96-103页
     ·CIB1 与 FOF1 在连续光照下具有相反的波形第96-97页
     ·ZTL 稳定 CIB1第97-99页
     ·FOF1 与 ZTL 在酵母里相互作用第99-100页
     ·FOF1 与 ZTL 在植物体内相互作用第100-101页
     ·ZTL 稳定 CIB1 蛋白的机理第101-103页
   ·讨论第103-104页
结论第104-106页
附件第106-109页
参考文献第109-129页
致谢第129-130页
附录 A 攻读学位期间所发表和完成的学术论文目录第130页

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